ДИАЗОРЕАКЦИИ

ДИАЗОРЕАКЦИИ в том смысле, как этот термин употребляется в лабораторной практике, заключаются в образовании окрашенных продуктов в результате воздействия диазореактива на исследуемые вещества. Веществ, дающих соединения сдиазореакти-вом, известно много. Наиболее интересны из них те, к-рые обладают яркой окраской, зависящей от образующейся при реакции азогруппы —N=N—. К таким веществам относятся напр. ароматич. амины и фенолы. В клинику Д. введена в 1882г. Эрлихом, к-рый открыл способность мочи при нек-рых заболеваниях давать интенсивную окраску с ди-азореактивом (Д.Эрлиха). Для реакции нужны 2 раствора. А: 0,5%-ныЙ водный раствор азотистокислого натрия NaN0₂, хранящийся в темной склянке с притертой пробкой; время от времени должен приготовляться вновь, т. к. при стоянии портится. В:о %₀-ный раствор сульфаниловой кислоты в разведенной соляной кислоте. Т. к. сульфаниловая кислота растворяется плохо, лучше всего растереть в ступке 5 з сульфаниловой к-ты с 50еж³соляной к-ты (уд. вес 1,12) и постепенно долить водой до литра. Раствор отстаивается или фильтруется. Оба раствора сохраняются отдельно, и непосредственно перед производством реакции 5—10 см³ раствора В смешиваются с несколькими каплями раствора А. Происходит быстрое диазотирова-ние сульфаниловой кислоты в диазосуль-фоновую. Образующийся реактив носит название диазореактива или реактива Эр лиха. SO_sH— C,H₄—NH_a (HC1) + NaNO_a = I------------------1 = SO,— C.H₄—N + NaCU + 2H₂0. Ill N Избыток раствора А может вредить чувствительности (не должно быть запаха окислов азота после встряхивания). Д. в моче. К приготовленному таким образом диазореактиву приливается равновеликий объем мочи (приблизительно), и смесь подщелачивается аммиаком. Реакция считается положительной, если появляется красное окрашивание раствора и пены его [см. отдельную таблицу, рис. 6 (I и II)]. При стоянии цвет часто бледнеет (сам диа-зореактив от прибавления аммиака принимает желтую окраску). Иногда после прили-вания кислого диазореактива к моче появляется яркожелтое окрашивание до под-щелачивания аммиаком. Эта желтая реакция Эрлиха (eigelbe primare Diazoreaktion) считается происходящей от уробилиногена, встречается при пневмонии и других б-нях, сопровождающихся выделением уробилиногена, и в клин, практику не вошла. Не получила распространения также и реакция Паули (Pauli; реактив +моча +сода). Д. не может быть проделана в желтушной моче, т. к. билирубин дает с диазореактивом темное красно-фиолетовое окрашивание, к-рое может служить доказательством присутст- вия билирубина, но не считается за положительную Д. Эрлиха в клин, смысле. Из лекарственных веществ алкалоиды, группа салициловой кислоты, антипирина, кофеина, а также и бензонафтол реакции не мешают. Приемы ортоформа и фенацетина вызывают красное окрашивание. Кетонурия красного окрашивания не дает, несмотря на то, что ацетоуксусная кислота реагирует с диазореактивом.—Не удалось еще выяснить, какое вещество появляется в моче при положительной Д. По хим. строению получающееся соединение должно соответствовать формуле: so₃h—с„н₄—n=n—r, где R — неизвестный радикал. Т. к. раствор его обладает интенсивной окраской, можно предположить, что диазосоединение сочетается с каким-то ароматическим или вообще циклически построенным телом, появляющимся в моче .Т.к. реакция ведется в аммиач-но-щелочной среде, это тело вероятно обладает свойствами амина или фенола. Мысль о том, что здесь имеет значение производное гистидина (заключающего в себе группу ими-дазола), не совсем убедительна, т. к. азо-соединения гистидиновых производных обладают другими свойствами. В некоторых случаях диазореакция Эрлиха повидимому обусловлена присутствием урохромогена и связана с реакцией Вейса, присущей этому телу (пожелтение мочи от прибавления нескольких капель раствора марганцовокислого калия). Вероятно существует несколько различных веществ, дающих диазореакцию Эрлиха. Удалось доказать, что иногда эти тела перегоняются с водяным паром, частью же связаны в виде эфиросерных кислот и освобождаются гидролизом. Эти данные говорят за фенольный характер их. Путем сложной обработки больших количеств нормальной мочи можно доказать, что ив ней имеются ничтожные следы дающих Д. веществ. Но типичная Д. в нормальной моче без предварительной обработки не наблюдается никогда. От питания, даже при умышленном кормлении тирозином и гистидином, реакция Эрлиха не зависит. В тяжелых случаях (тиф, tbc, менингит) с положительной Д. б-ные находятся в бессознательном состоянии и часто голодают. Поэтому приходится думать о значении внутриклеточного эндогенного обмена для реакции Эрлиха. Происходящие от распада клеточного белка циклические соединения окисляются в боковых цепях, но кольцевые части ускользают от разрушения, и образовавшиеся тела типа моно- или полифенолов попадают в мочу и дают Д. Эрлиха. Интенсивность ее часто резко меняется в короткий срок. Клин, исследований о появлении Д. в моче сделано много. Чаще всего реакция наблюдается при лихорадочных заболеваниях. На первом месте стоит корь, при которой Д. не имеет дурного прогностического значения и появляется часто и в доброкачественных случаях. Напротив, при скарлатине Д. наблюдается редко и здесь свойственна более тяжелым формам. Все тифы, особенно брюшной и сыпной, могут дать положительную Д. Чем сильнее лихорадочные явления, тем резче обыкновенно выражена Д. Однако она даже и в тяжелых случаях может отсутствовать.

i f

*sff

3 6

line. L ii 2. \\>№кг\ио\ул\л lmMosa licrcdiloria. Рис 3. DcnnaLltLS JicrpcLifonais Untiring. (Рисунок 1—3 из ГпеЬоеь'о.) Рисунок 'I. /lt±ui t/ лихорадь^, Рис, -^г]. Дуод^имьпин сок: ^—* нормал ыпл1; 7/— дунд*: пильни и сок <ie|>ra 10 ыни. посте иасдеппн сирчокнелич Mflr-неэнн (нузирчни желчь); ///—дуоденальный сок спусти час после мрел идущего j печен очная желчь): IV — дуоденальный сок нрч чо.!нон закупорка желчных путев (reap, при ынсленнн ?фнра)--панкрсатччсскнн сок. Рисунок В, / ч // — Лндоорелкпня Эрлнха а моче: t ■ отрнтнэ тельная (пена желтан): II— положительная (пена к^рмпнокрнечан). Iff— положительна*! прямая дипзпреакпин MijHluiis v* el. burffh'n а кропи; IV и V—резко и умеренно положи гел ьиая непрямая днаэориакцнн llijinanb V, d. I V:\ i.":i. К ст. Денгс лихорадка, Диаэарсатиш, Дуоденальный зонО, Дюрита бояезнь, flpittfrmotyifs bfiiioSQ. to» Время появления реакции различно, иногда она заметна уже к концу первой недели. Изменения яркости совпадают с улучшением и ухудшением состояния б-ного. При рецидивах пропавшая Д. появляется вновь. Туберкулез во всех своих проявлениях при высокой t° может дать Д. Предсказание этим омрачается, но не должно считаться безусловно дурным. Всевозможные септические процессы также вызывают реакцию Эрлиха. Реже она описывалась при высокой t°, зависящей от других инфекций (грип, ангина и т. д.). Указать такой тяжелый лихорадочный процесс, при котором Д. не может появиться никогда, едва ли возможно. Значительно менее характерна Д. для новообразований, б-ни Годжкина и т. д. Таким образом реакция Эрлиха не есть симптом одной какой-либо б-ни и для диагностики применима только при одновременном учете всех клин, и лабораторных данных. Больше значения она имеет для характеристики обмена веществ и оценки общего состояния б-ного. Во всех случаях продолжительного существования Д. имеется дело хотя и с поправимым, но глубоким и существенным пат. уклонением обмена, и положительная диазореакция всегда говорит о некоторой тяжести болезненного процесса (кроме легких случаев кори). е. Фромгольд. Диазореакция в крови служит для определения в ней билирубина. Еще в 1883 г. Эр-лих указал на характерное красно-фиолетовое окрашивание, к-рое дает диазореактив с билирубином; Прёшеру (Proscher) в 1900 г. удалось доказать, что оно зависит от образования азобилирубина. В клин, практику для определения билирубина крови Д. была введена лишь в 1913 г. Гиманс ван ден Бергом (Hijmans v. d. Bergh), имя к-рого она в данное время и носит. Благодаря своей простоте и высокой чувствительности (открывает билирубин в разведении 1:1.500.000) она пользуется в наст, время наибольшим распространением сравнительно с другими реакциями для определения билирубина крови. Она пригодна не только для качественного, но и для количественного его определения. Для качественного определения может служить т. н. «прямая реакция» Г. ван ден Берга: к 1 см³ сыворотки—цельной или разведенной в зависимости от степени желтушности—прибавляют ^х/₄—¹/_t объема реактива Эрлиха; быстро наступает красно-фиолетовое окрашивание раствора. Для контроля его сравнивают при падающем дневном свете на белом фоне с соответственно разведенной сывороткой без диазо-реактива. В 'Зависимости от быстроты наступления окраски различают: 1) быструю прямую реакцию [см. отдельную таблицу, рис. 6 (III)]—окраска появляется немедленно, maximum ее интенсивности не позже 30 секунд с момента прибавления реактива; такой тип реакции дает, по ван ден Бергу, билирубин, уже выделенный печенью в желчь и при застое последней вновь всосавшийся в ток крови («застойный билирубин» Lepehne); 2) замедленную прямую реакцию—начало реакции через 2—4 мин. и позднее; ее дает, по ван ден Бергу, билирубин, еще не прошедший печени (билирубин крови при гемолитической желтухе, злокачественном малокровии и т. п., «функцио нальный билирубин» Lepehne). Между этими типами существуют переходы—т. н. двухфазная прямая реакция: быстрое появление начала окраски с последующим ее усилением.—Для количеств, определения билирубина по ван ден Бергу пользуются обычно так назыв. «непрямой реакцией»: к 2 см³алкоголя (96%) в пробирке центрифуги приливают 1 см³ цельной или разведенной (в зависимости от степени желтушности) сыворотки, не содержащей растворенного вследствие гемолиза гемоглобина; центрифугируют, отсасывают 1 см³ жидкости, находящейся поверх свернувшегося осевшего белка, прибавляют 0,25 г свеже приготовленного диазореактива, выжидают 2—3 мин. максимума реакции и подвергают исследованию в колориметре Аутенрита (Autenrieth) [см. отдельную таблицу, рис. 6 (IV и V)]; стандартом служит клин, наполненный раствором 2%-ного сернокислого кобальта или раствором 1:32.000 роданистого железа в эфире (последний соответствует содержанию билирубина 1:200.000). Найденные величины выражают в условных единицах; за единицу принимают содержание билирубина 1 : 200.000. За последнее время предложен ряд модификаций реакции ван ден Берга для количественного определения билирубина крови. Широкого применения в клинике они пока не нашли. На способности различных сывороток давать различные типы реак- -ции ван ден Берга основано применение ее в клинике для диференциальной диагностики застойных желтух от желтух другого происхождения. Реакция ван ден Берга имеет также большое значение для диагноза т. н. лятентных желтух, т. е. желтух без видимой желтушной окраски покровов. Диазореакция для определения билирубина в дуоденальном содержимом, в трансудатах и эксудатах производится так же, как и в сыворотке. Д. необходимо производить по возможности быстрее после получения подлежащей анализу жидкости во избежание быстро наступающего разложения билирубина (особенно на Свету). Б. Ильинский. Лит.: Румянцев Ф., Диазореакция EhrJicli'a и реакция с 10 %-ным водным раствором азотнокислой закиси ртути при брюшном тифе, кори и скарлатине, Врач, газета, 1912, И 32; Andrewes С, An unexplained diazo-colour reaction in uraemic sera, Lancet, v. I, 1924; В echer E., Die Diazo- u. Uro-chromogenreaktion im Blutfiltrat bei Niereninsuffi-cienz, Deutscn. Arch. f. klin. Med., B. CXLVIII, 1925; van den Bergh H., Der Gallenfarbstoff, Lpz., 1918; Ehrlicb P., TJber eine neue Harnprobe, Zeif-schrift f. klin. Med., B. V, 1882; Hermanns L., TJber den TJrsprung der Ehrlichschen Diazo-Reaktion, Deutscn. Arch. f. klin. Med., B. CLII, 1926; Hunter G., Colour standards for use in the determination of iminazoles, Biochemical journal, v. XIX, 1925; Weiss M., Zur Frage der Dlazoreaktion und ihrer Bedeutung bei der Lungentuberkulose, Deutsche med. Wochenschr., 1925, № 31; о н ж е, Die Diazoreaktio-nen des Harnes u. die Beurteilung der Urochromogen-ausscheidung, Biochem. Zeitschr., B. CXXXIV, 1923.

Смотрите также:

ДИАЗОСОЕДИНЕНИЯ, органические вещества, содержащие подобно азосоединениям группу N2.H3 всех Д. особое значение имеют соединения, отвечающие структурной фор- Аг . N = N муле, | ...
ДИАЗОСОЧЕТАНИЯ, хим. реакции между диазониевыми солями (см. Диазосоединения) с одной стороны и ароматическими аминами или фенолами (нафтолами)—с другой. При Д. группа—N2—сохраняется, образуя связь между обоими компонентами реагирующей системы. При помощи ...
ДИАЛЕКТИЧЕСКИЙ МАТЕРИАЛИЗМ И МЕДИЦИНА. Вопрос о применении Д. метода в медицине и биологии, несмотря на все его огромное принципиальное и практическое значение, отнюдь не является достаточно разработанным. Лишь в самые последние годы стали ...
ДИАЛЕКТИЧЕСКИЙ МЕТОД, см. Диалектический материализм и медицина. ДИАЛИЗ,освобождение коллоидов от кри-сталлоидных примесей посредством диффузии последних через мембраны, непроницаемые для коллоидов. Одним из важнейших различий между коллоидами и кристаллоидами, заставившим Грэма (Graham) ...
ДИАЛИЗАТЫ, подвергшиеся диализу (см.) с целью освобождения от кристаллоидов препараты. Среди галеновых препаратов многие обязаны своим действием высокомолекулярным составным началам, ...