МИКРОФОТОГРАФИЯ
Рис.
Вертикальная камера Цейса. личениями (до 30 раз и менее).—Микрофотографические установки различных фабрик отличаются достаточно большим разнообразием. Их можно разделить на три группы: малые (обычно для пластинок раз-
рис. з.
мера 9x12; рис. 2 и 3), средние (13x18 и 18х24; рис. 4 и 5) и большие (24х 30; рис. 6). Для большинства работ установки на 9х х12 являются вполне достаточными. Обычно они приспособлены только для съемок с вертикально расположенным микроскопом, что нисколько не вредит делу. Для более тщательных работ заслуживают уже
Рисунок 4. Камера Цейса 18x24: а—в вертикальном, Ь—в горизонтальном положении.
несомненного предпочтения камеры большого размера, с возможностью вертикального и горизонтального их расположения, снабженные «оптической скамьей». Большие модели необходимы лишь для самых тонких исследований. Особенную ценность в них составляет (рис. 6) независимое рас- положение микроскопа с осветительными приборами и собственно камеры на двух самостоятельных подставках. Таким способом устраняется передача сотрясений с осветительной части на камеру, почти не-
Рисунок 5. Универсальный аппарат Рейхерта 13x18.
избежная в других установках и крайне нежелательная в точных работах с большими увеличениями. Во избежание влияния сотрясений нек-рые крупные микрофотографические установки по специальному заказу могут быть снабжены рессорными пружинами. Большая модель при наличии у нее длинного двухсоставного меха обладает очень большим растяжением, что иногда также весьма существенно. Новейшие крайне разнообразные модели микрофото-графич. установок различных фирм в наст. время снабжаются целым рядом усовершенствований, облегчающих и ускоряющих работу. Большие установки Цейса при более высокой стоимости полнее других удовлетворяют основным требованиям геометрической оптики. В дальнейшем будет приниматься во внимание преимущественно такая модель как самая совершенная. Особое положение занимают выпущенные сравнительно недавно Цейсом, а затем Лей-цем и Рейхертом особые окуляры-микрокамеры, укрепляемые непосредственно на тубусе микроскопа. Все эти крайне практичные и удобные модели обладают еще и тем совершенно исключительным достоинством, что позволяют наблюдать объект во время самой съемки. Благодаря наличию моментальных затворов подобного рода камерами можно делать при достаточно интенсивном освещении моментальные съемки и с подвижных объектов (рис. 7). Основные предпосылки при М. Получение доброкачественных М., особенно при больших увеличениях, во многом зависит от устранения каких-либо сотрясений во время съемки; поэтому нужно рекомендовать для микрофотографич. работ отдельную комнату, лучше в нижнем этаже; во время экспозиции тщательно избегать каких-либо толчков, движения по комнате людей и пр. Весьма целесообразно вести работу в слабо освещенной комнате и безусловно необходимо устранять всякий излишний свет, непосредственно падающий на препарат и микроскоп. Все линзы должны быть в состоянии полной чистоты. Наличие пыли вызывает диффракцию света и вредит изображению. Следует тщательно избегать усиленной чистки и протирания линз. Всего лучше, раз вычистив их осторожно замшей или мягкой старой полотняной тряпочкой, тщательнейше избегать в Дальнейшем всяких прикосновений пальцев к стеклам. Пыль смахивать мягкой широкой кисточкой. Почти каждая микросъемка имеет свои специфические , особенности, и поэтому для работающего очень существенно знакомство с теоретическими основами построения изображения и умение разбираться в отдельных случаях.
Рисунок 6. Большая камера Цейса.
Освещение. Приступая к микрофотографированию, прежде всего обращают внимание на правильное взаиморасположение микроскопа и камеры: обе части должны быть установлены строго на одной оптической оси и надежно закреплены. Далее встает вопрос об освещении—основном факторе, от которого зависят все конечные результаты. Освещение препарата должно быть сильным и равномерным, и для этой цели помимо имеющегося в микроскопе осветителя Аббе (конденсора) приходится прибегать к помощи различных вспомогательных линз, а также заботиться о правильном выборе самого источника света. Рассеянный дневной или прямой солнечный свет из-за целого ряда затруднений почти не применяется для М. От источников искусственного света теория с точки зрения М. требует возможно большей интенсивности, достаточной по размерам светящейся поверхности при возможной равномерности накала ее во всех точках. В той или иной степени можно пользоваться любым источником света и, если пренебречь первым требованием, то хорошая керосиновая лампа с плоским фитилем может оказаться вполне пригодной. Однако понятно, что удобства электрического освещения настолько велики, что в настоящее время почти исключительно применяют это последнее. Как известно, вольтова дуга (постоянного тока) в отношении интенсивности стоит на первом месте (после прямых солнечных лучей), и это обстоятельство заставляет прибегать к ней именно в тех случаях М., где эта интенсивность имеет превалирующее значение. Однако пользование вольтовой дугой имеет ряд неудобств и в большинстве случаев ее стремятся заменить другими источниками. Весьма совершенны например «точечные лампы» (Punktlampen). Однако они недолговечны, требуют очень умелого и осторожного обращения с ними и дороги. Обычные лампы накаливания, в том числе и полуваттные, мало пригодны вследствие растянутости их накаливающейся нити. Их с успехом заменяют т. н. про- екционными лампами накаливания с особым расположением нити, а еще лучше—маловольтными лампами с толстой нитью накала. Так как такие лампы тоже довольно дороги, настоятельно рекомендуется включать их через соответствующий регулирующий реостат, используя их полный накал лишь в момент самой съемки. Таким путем удается повысить срок их службы в 5—-6 раз. Каков бы ни был источник света, для' использования его безусловно необходима особая двояковыпуклая линза, т. н. коллектор, снабженный ирисовой диафрагмой. Это обусловливают две причины: во-первых светящаяся поверхность всех описанных источников все-таки недостаточна по своей площади, а во-вторых для правильного использования она должна была бы быть помещена в непосредственной близости от конденсора микроскопа, что очевидно невозможно. Отбрасывая коллектором увеличенное изображение светящейся поверхности в плоскость диафрагмы осветителя Аббе, устраняют оба эти затруднения. Коллектор располагается близ источника света на оптической скамье (массивной металлической штанге). По оптической скамье на особой подставке—-рейтере коллектор может передвигаться ближе и дальше от источника света и закрепляться в любом месте. Таким же способом устанавливаются и другие добавочные линзы, а также особые сосуды с плоско-параллельными стеклянными стенками (рис. 6 и др.). Установка источника света на нек-ром расстоянии от микроскопа важна уже и потому, что этим в значительной степени ослабляется вредное влияние на препарат и самый микроскоп излишних тепловых лучей . Часто приходится итти еще дальше и устанавливать на оптической скамье «те-плофильтры», т. е. упоминавшиеся выше сосуды с плоско-параллельными стеклянными стенками, наполняя их водой или, лучше, раствором соли Мора, калиевых или железо-аммиачных квасцов. Те же кюветы, наполненные растворами красящих веществ, являются и светофильтрами (см. ниже). А. Келером (A. Kofyler) было установлено очень важное положение, согласно к-рому препарат будет освещен наиболее сильно и ровно, если все оптические системы будут установлены так, что в плоскости препарата возможно лучше будет спроецирована диафрагма коллектора. Это положение осуществляется в свою очередь при том условии, что источник света будет возможно лучше спроецирован в плоскости диафрагмы осветителя. Т. о. формулируется правило, помогающее разрешению
-il
Рисунок 7. Окуляр-камера ITetica «Фоку». одной из важнейших подготовительных работ—правильному освещению препарата. Согласно этому первейшей задачей работающего является «центрировать» источник света относительно правильно укрепленного микроскопа. При работах с вертикально стоящим микроскопом закрывают зеркало микроскопа листком бумаги и при помощи имеющихся приспособлений передвигают источник света вверх—вниз, вправо—влево, пока он не займет правильного положения; передвижением коллектора проецируют источник света, хотя бы приблизительно, на зеркало. Далее движениями зеркала отбрасывают пучок на диафрагму осветителя. Целесообразно в плоскости диафрагмы временно поместить кусок серой бумаги и на нем передвижением коллектора получить возможно ясное изображение. Дальнейшие незначительные исправления достигаются передвижением зеркала. При горизонтальной съемке зеркало микроскопа удаляют и наводку производят тем же порядком непосредственно на диафрагму (или на бумагу). Очень существенно, чтобы изображение по возможности заполняло всю диафрагму, не выходя за ее пределы. В своих установках Цейс вводит на скамью особую линзу Z70, имеющую приспособление для движения вправо, влево, вверх, вниз и облегчающую окончательную тонкую установку (рис. 8). Пучок света, отброшенный на плоскость диафрагмы конденсора, преломившись в его линзах, поступает в дальнейшем в объектив и окуляр микроскопа. Конденсор Аббе играет чрезвычайно большую роль в постро-- ении изображения при субъективном наблюдении, что обычно недооценивает большинство микроскопистов-практиков; при проекции значение его становится решающим. Осветитель Аббе по существу представляет собой перевернутый микроскопич. объектив с фокусным расстоянием около 10—12 мм. Как указано выше, задачей его в данном случае является проекция возможно резкого изображения диафрагмы коллектора в плоскости препарата. К сожалению обычные осветители микроскопов, не исправлен- ий, F Z10 DaU Рисунок 8. а—источник света; К—коллектор; Dx— его диафрагма^—кюветы для фильтров;Д,—диафрагма конденсора; М—столик микроскопа. ные на сферическую и хроматическую аберрацию, не в состоянии полностью разрешить эту задачу. Поэтому при М. весьма желательно пользоваться более совершенными (и дорогими) осветителями: аплана-тическим или еще лучше—ахроматическим (рис. 9). Можно в качестве осветителя применять слабые объективы микроскопа, пользуясь для этого специальной оправой. При очень большой точности устройства ахроматического осветителя или при работе с объективом требуется особо точная установка этих частей по оптической оси микроскопа, что достигается специальным приспособлением. Для получения хороших М. очень важно полностью овладеть конден-
Рисунок 9. а—апланатический конденсор ар. 1,4; Ь—ахроматический конденсор ар. 1,0; с—центрирующаяся оправа для использования слабых объектов в качестве осветителя.
сором микроскопа и научиться правильно использовать диафрагму установки. Если поместить на предметный столик микроскопа какой-либо препарат, предварительно достаточно сузив диафрагму коллектора, то обычно ожидаемого изображения ее па препарате мы не увидим—■ для этого необходимо несколько отодвинуть весь осветитель (конденсор). Установив т. о. изображение , следует движением коллектора или центрирующей линзы вновь исправить проекцию изображения источника света на диафрагму конденсора. Если теперь, открыв диафрагму коллектора, мы будем наблюдать за сильно освещенным препаратом, то заметим, что сужение упомянутой диафрагмы начинает ограничивать освещенную часть препарата, но не оказывает почти никакого влияния на яркость освещения. На этом основании диафрагму коллектора можно назвать диафрагмой поля освещения (рисунок 8, Dt). Пользование ею имеет свое важное значение для качества фотограмм, и здесь можно установить твердое и непременное правило: диафрагма поля освещения никогда не должна быть расширяема дальше пределов препарата, непосредственно подлежащих съемке. Излишек света, падающий на препарат, не приносит ни малейшей пользы при съемке; наоборот, порождая ненужные рефлексы, он весьма сильно влияет на четкость негатива. Обратимся теперь к изучению действия диафрагмы конденсора. Снабдим микроскоп объективом и окуляром для субъективного наблюдения; для того чтобы не вредить глазам очень сильным светом, необходимо уменьшать накал лампы реостатом или как-нибудь иначе ослабить освещение (поместив напр. где-нибудь на пути пучка тонкую бумагу). Суживая диафрагму конденсора, мы замечаем, что она уже не имеет ни малейшего влияния на изменение размеров поля освещения, но зато сдвигание ее сильнейшим образом действует на силу света и характер изображения: интенсивность освещения уменьшается, резкость, четкость и глубина картины возрастают. Если, сильно уменьшив диафрагму и вынув окуляр, посмотреть на заднюю линзу объектива, то мы увидим лишь небольшой светлый кружок в его центре; если начать раздвигать диафрагму осветителя, то светлый кружок будет расширяться; другими словами, мы видим, что диафрагма правильно постав- ленного конденсора непосредственно управляет действующим отверстием объектива— его апертурой; поэтому диафрагму эту называют диафрагмой апертуры (рисунок 8,D3). Постепенное увеличение диафрагмы расширяет зрачок объектива до его полного отверстия, определяемого оправой стекол. В большинстве случаев диафрагма конденсора к этому моменту окажется открытой далеко не полностью. Естественно, что дальнейшее расширение ее не может уже оказывать ни малейшего влияния на объектив. Момент, когда отверстие диафрагмы «совпало» с полным отверстием объектива, показывает, что теперь апертуры осветителя и объектива равны; при дальнейшем увеличении апертура конденсора становится больше апертуры объектива; в противоположном случае—меньше. Апертура конденсора имеет решающее значение для характера и свойства изображения; однако здесь уже крайне трудно дать какие-либо точные руководящие указания-—размеры диафрагмы определяются особенностями препарата и желанием снимающего придать микрофотограмме тот или иной характер. Из изложенного выше однако ясно, что применение апертуры конденсора большей, чем у объектива, совершенно нецелесообразно; с другой стороны теория и практика показывают, что уменьшение апертуры дальше известного предела вызывает явления диффракции и также вредит изображению. Нек-рые практики М. рекомендуют производить съемку при 2/3 апертуры объектива. Правильнее все же руководствоваться свойствами препарата. Объективы. При работе по М. безусловно следует отдать предпочтение апохроматам. Однако и ахроматические линзы при" применении светофильтров являются вполне пригодными. Следует указать также, что при микрофотографии несравненно выгоднее для смены объектива пользоваться не револьвером, а санным приспособлением, позволяющим более точную центрировку. При выборе номера объектива в общих чертах руководятся следующим основным правилом: применять для больших увеличений более сильные номера, а не прибегать к сильным окулярам или чрезмерному растяжению меха. Однако следует помнить, что увеличение силы объектива сопряжено с уменьшением его глубины, что крайне невыгодно для микрофотографии. Поэтому иногда оказывается очень полезным производить съемку с меньшими номерами и последовательно делать увеличения с негатива. Очень полезно иногда также пользоваться боковым освещением. Окуляры. Обычно применяемые в микроскопии окуляры, компенсационные и Гюйгенса, мало пригодны для М. 1) Они рассчитаны на субъективное пользование и не могут при нормальной установке дать проекцию на матовом стекле. Для этого необходимо или несколько выдвинуть верхнюю линзу окуляра (тем больше, чем ближе расположено матовое стекло) или микрометрическим винтом несколько отвести всю трубу микроскопа; первое хлопотливо и неудобно, второе нарушает правильность расчетов линз и вредит изображению. 2) Упомянутые окуляры дают значительное искривление поля зрения. При субъективном наблюдении с этим мало считаются, т. к. беспрерывная работа винтом исправляет неровности, а при М. этот недостаток губит дело, т. к. мы постоянно будем иметь на снимке или резко наведенный центр и неясные края или наоборот. Уже давно Цейсом были предложены особые проекционные окуляры, вполне разрешающие первое затруднение, но не исправляющие выгнутости поля. В настоящее время оба недостатка устранены недавно выпущенными Цейсом окулярами для М., т. н. гомалами. Их имеется 3 номера, все одинакового увеличения, но различные для объективов различных фокусных расстояний. Гомалы относятся к типу компенсационных окуляров, т. е. пригодны для апохроматов (и-сильных ахроматов) и только в штативах с широкой трубой. Для субъективного наблюдения они непригодны вовсе. Нужно-впрочем заметить, что многие фирмы в наст. время вырабатывают окуляры для субъективного наблюдения со значительно исправленной кривизной поля зрения. Такие «пла-нокуляры» Рейхерта, перипланатические Лейца и др. естественно более удобны и для микрофотографии. Светофильтры. Безусловная необходимость применения светофильтров при М. основывается, на следующем. 1) Фотопластинка «видит» предметы не так, как наш, глаз. Рисунок 10 изображает схему спектра всех наибольшая наибольшая яркость для "" яркость глаза Для обычной пластинки * р _________:__________с_;_____________ 11|1111П1 I I | I I I I | ! I I I | I I I—I—|----1—Г-Н------1------1------- 700 600 550 500 450 400 красный оранж. желтый зеленый голубой синий фиолетовый Рисунок ю: воспринимаемых глазом лучей, причем наиболее действующей на сетчатку нашего глаза, т. е. наиболее «яркой», является желтая часть спектра с длиной волн от 530 до-620 т/и. На отд. таблице (к ст. Неврофиброматоз, рисунок 2) приведена фотография спектра на обыкновенной пластинке; здесь наибольшая яркость лежит между 425—• 480 т/и. Следовательно пластинка передает• светлые-—желтые—-тона как темные, а темные—синие—как светлые. 2) Обычные не-апохроматические объективы, рисуя изображение бесцветного препарата, дают в сущности несколько близко друг к другу расположенных, но не сливающихся в одной плоскости цветных его изображений. Делая точную наводку глазом на препарат и руководствуясь при этом нами лучше воспринимаемыми желтыми лучами, мы еще не получим точной наводки для пластинки, сильней воспринимающей синие и фиолетовые изображения. 3) В М. обычно приходится иметь дело с микроскопич. препаратами, нарочно покрашенными в различные цвета для выделения различных частей; при этом легко может случиться, что пла- стинка будет не в состоянии обнаружить контрасты, резкие для глаза. При пользовании светофильтрами обязательно употребление ортохроматических пластинок, т. е. также как и глаз, ярко «видящих» желтые цвета. [Рисунок 1 (см. отдельную таблицу к ст. Неврофиброматоз) изображает спектр, снятый на такой пластинке.] Иногда употребляют панхроматические пластинки, т. е. чувствительные почти ко всем цветам. Светофильтры представляют собой те или иные прозрачные окрашенные среды, пропускающие через себя одни цвета спектра и поглощающие другие. Употребляют жидкие светофильтры, чаще всего водные растворы тех или иных красящих веществ, наливаемых в упомянутые выше кюветы (рисунки 6 и 8), и твердые массивно окрашенные стекла, стекла с нанесенным на их поверхность слоем окрашенной желатины или коллодия, желатиновые или коллодийные пленки. Во всех случаях такие светофильтры включаются где-нибудь по пути светового пучка, падающего на препарат. Безукоризненные светофильтры для всех случаев изготовляет фабрика светофильтров Lifa в Аугсбурге (Бавария). При наличии красок светофильтры, особенно—жидкие, легко могут быть изготовлены и самостоятельно; твердые приготовлять труднее. Включением нужных светофильтров в систему освещения устраняются указанные выше затруднения, и ахроматические объективы, для которых они безусловно обяза- тельны, приравниваются к апохроматам; однако и при последних во многих случаях все же неизбежны светофильтры. Основной задачей^светофильтров является чаще всего ослабление чрезмерного действия синих и фиолетовых лучей, иногда полное выключение тех или иных цветов. При работах с окрашенными препаратами умелым подбором светофильтров можно резко выделить многие подробности препарата (см. отдельную таблицу к ст. Неврофиброматоз, рис. 3 и 4). Каждый светофильтр характеризуется полным поглощением известных цветов спектра или по крайней мере частичным их ослаблением. Понятно, что из всего количества световой энергии, несомой сложным белым световым пучком, в светофильтре задерживается определенная часть, иногда весьма значительная. В силу этого применение светофильтров при Съемке неминуемо связано с удлинением времени экспозиции, иногда в два-три раза, а иногда и в сотни раз. Для всякого светофильтра путем особых измерений можно определить его спектр поглощения, что дает вполне ясную характеристику данного светофильтра. Выбор светофильтра для каждого отдельного случая зависит от опытности и знания работающего (рисунок 11). Для изготовления самодельных светофильтров нужно иметь ряд специальных органических красок; во многих случаях можно обойтись однако и без них, пользуясь Цетновским зеленым светофильтром Окраска Эозин Бисмаркбраун Конгорот Пикрокармин . Фуксин, метилви-олет ........ Гематоксилин Гейденгайна . Метилгрюн.....красный Метилблау.....тёмнокрасный Окраска светофильтров
сине-зеленый
темнозеленыи а ■» Ь » » с » » d » » Е F
\ употребляются лишь на панхроматических пластинках
Рисунок 11. Спектры поглощения ряда светофильтров Lifa для наиболее употребительных окрасок микроскопических препаратов. Заштрихованная часть спектра поглощается светофильтром; остающаяся светлая часть—действующие на пластинку лучи. Буквы наверху—обозначение Фраунгоферо-вых линий; цифры внизу—длина световых волн (в rn.fi). *1в (115 г медного купороса, 11,5 г двухромо-кислого калия на 1 000 ч. воды). Необходимо помнить, что установка на фокус должна •обязательно производиться с уже включенным светофильтром. М. при различных увеличениях. Описанное выше расположение приборов предназначено для работ с сильным объективом, с апертурой от 0,6 и выше. При этих условиях необходимо, установив препарат, позаботиться только о возможно точной наводке изображения на матовое стекло камеры. Тщательная коррекция на толщину покровного стекла объективов с соответствующими оправами в М. еще важнее, чем при микроскопическ. наблюдениях. Здесь обычно прибегают к помощи т. наз. лупы для наведения (рис. 12). При наиболее тонких работах вместо матового стекла устанавливается прозрачное, на к-ром изображение может быть уловлено лишь упомянутой лупой. При работах с более слабыми объективами описанная установка освещения и конденсора непригодна. Освещение препарата в этом случае получается хотя и ярким, но покрывающим лишь очень небольшой участок его в центре поля зрения. Обычно практикуемое в таких случаях приближение или удаление конденсора в М. отнюдь не может быть допускаемо, так как этим в корне нарушается весь ранее указанный принцип. Правильной мерой является удаление верхней линзы конденсора, причем получается осветитель с меньшей апертурой и большим фокусным расстоянием (36 мм), дающий освещение большей поверхности препарата. Одновременно с этим в приборах Цейса вводятся дополнительные линзы: в коллектор вставляется т. наз. вспомогательная линза HQQ, а вместо ^70 ставится Z40 (цифра обозначает длину фокусного расстояния), и производится проверка установки по ранее описанному принципу (рис. 13). При увеличениях еще меньших (до 30 и меньше) изменения установки еще более значительны. Съемки производятся уже не обычными объективами с окулярами микроскопа, а особыми системами, употребляемыми без окуляров, т. н.
Рисунок 12.
гг»,нбб F Z40 Рисунок 13. D3M планарами и микротарами Цейса, сумма-рами Лейца, микрополярами Рейхерта и др., разных номеров, с фокусным расстоянием от 35 до 100 мм. В виду их больших фокусных расстояний и широкого поля зрения ' эти объективы полностью могут быть использованы лишь у штативов с широким тубусом, причем удаляются верхние и нижние фланцы и объективы прикрепляются к особой «воронке», ввинчиваемой вместо окулярного фланца тубуса (рис. 4). Осветительная система также в корне меняется: фокусное расстояние конденсора, даже развинченного, оказывается вновь недостаточным, и он удаляется вовсе; вместо него вводятся особые линзы, т. н. «очечные стекла» (Brillenglaser) различных фокусных расстояний, в зависимости от фокуса употребляемого объектива. В коллектор вставляется вспомогательная линза Hi00 и вводится новая линза «коллектив» К20, а также ирисовая диафрагма D2, которая и служит теперь апертурной диафрагмой (рисунок 14). Наконец при замене коллектора двумя специальными большими линзами и при наличии особой подставки, а также обычного, хорошего объектива, эта установка Цейса может служить также для снимков в натуральную величину или увеличения в 2—3 раза (срезы мозга, диапозитивы и пр.). Руководясь приведенными выше схемами при различных увеличениях на наиболее совершенной установке Цейса с различными дополнительными линзами, работающий сумеет без особого труда создать возможные оптимальные условия съемки при более ограниченном оборудовании или на других установках и даже на самодельном аппарате, с самыми примитивными имеющимися в его распоряжении средствами. Легко можно убедиться, что успех в М. гораздо больше зависит от правильного использования имеющихся возможностей—понимания поставленной цели, знания фотографического процесса, чем от самого оборудования. М. в темном поле зрения. Трудности получения М. в темном поле зрения сводятся почти исключительно к правильной, строго центральной установке освещения. Съемка может быть выполнена с любым конденсором темного поля. Наиболее эффективным, но в то же время требующим F Z40 D2 Рисунок 14. Z20 D3M особенно тщательной установки, является однако к а р д и о и д-к онденсор Цейса последнего выпуска. Во всех случаях требуется применение вольтовой дуги; при достаточном умении и небольшом растяжении камеры возможно получение и моментальных экспозиций. М. непрозрачных объектов при падающем свете. Основное затруднение при пользовании даже небольшими увеличениями состоит в освещении объекта светом, возможно круче падающем сверху (во избежание резких теней, могущих совершенно исказить облик предмета). Цейс пытается разрешить эту задачу двумя способами. а) На особых держателях над препаратом помещается тонкое круглое матовое стекло, освещаемое сбоку очень сильным пучком света, а с другой стороны устанавливается вогнутое или плоское зеркало; в результате объект получает почти ровное без теней освещение; ни то ни другое стекло не должно закрывать объектива (микропла-нара или др.) (рис. 15а). б) На пути между объективом и объектом устанавливается под углом в 45° очень тонкое плоско-параллельно отшлифованное стекло, не препятствующее прохождению лучей от объекта в объектив. Со стороны на это стекло направляется
Рисунок 15.
сильный пучок света, который (правда с потерями до 50%) сверху освещает объект. При таком расположении возможна работа при небольших увеличениях со всеми специальными объективами типа планара и др. (рисунок 15 Ь). При применении собственно микроскоп, объективов, даже малых, расположить нужным образом эти осветители нехватает места. Существуют однако специальные приспособления, позволяющие использовать даже сильные объективы. К таковым относится наприм. вертикальный иллюминатор Наше (Nachet) (рисунок 16), имеющий внутри особую призму, отражающую на препарат направляемый сбоку свет. Призма наполовину закрывает действующее отверстие объектива, т. е. уменьшает его апертуру. Поэтому этот осветитель не годится для сильных систем; кроме того он требует особых укороченных объективов и дает удовлетворительные результаты лишь при наблюдении без покровного стекла. Рисунок 17 изображает вертикальный осветитель по Беку (Beck), где свет отражается от плоско-параллельного стекла. Модель эта может употребляться также и с сильными объективами и при наличии покровных стекол. Несмотря на то что обе системы оптически имеют ряд существенных недочетов, иногда они оказываются очень полезными, особен-
РИС. 16
но в металлургии при съемках микроструктур сплавов и т. п. М. в поляризованном свете предполагает знание как теории, так и прак-----------------; тики поляризационного микроскопа. Наибольшие затруднения представляют съемки при слабых увеличениях (планарах и пр.). Для своих установок Цейс конструирует специальн. поляризаторы и анализаторы, позволяющие полностью разрешить соответствующие задачи. Стереоскопическая М. В связи со все бблыним и большим распространением би-нокулярно -стереоскопического метода микроскопирования возрастает и значение стереоскоп. М. В самом деле бинокулярное микроскопирование и тем более стереоскоп. М. очень часто дает ключ к пониманию сложнейших и труднейших картин, особенно в цитологическом исследовании (счет хромосом и пр.). Как известно, в целом ряде микроскоп, работ с большим успехом находит себе применение «бинокулярный микроскоп» с двумя объективами ! и окулярами, дающий средние __________I увеличения до 200—400 раз. В связи с этим следует упомянуть стереокамеру, уже давно предложенную Дюннером (Dilnner) (рис. 18). Недостаток этой стереокамеры в первоначальной конструкции заключался в том, что микрофотографирование производилось одними объективами без предельное увеличение было весьма незначительно (30—-40 раз) при очень малой глубине фокуса в связи с отсутствием осветителя и диафрагмы в объективах. Для устранения последнего недостатка можно рекомендовать применение на объективах самодельных диафрагм; первый недостаток при отсутствии у камеры меха остается неустра-ненным. Лишь недавно Цейсом сконструирована особая насадка из двух окулярных систем типа гомалов, вчетверо усиливающих объективное увеличение (рисунок 19). Существует однако иной способ получения сте-реомикрофотограмм при помощи обычного монокулярного микроскопа в пределах всех имеющихся увеличений. Для получения телесного. изображения необходимо, как известно, наличие двух снимков с объекта, сделанных под нек-рым углом с двух различных точек зрения, в полном соответствии с различным видением нами предмета правым и левым глазом. Требуемый резуль- окуляров, почему тат может быть достигнут без особого труда двумя последующими съемками: 1) при параллельном перемещении камеры (или только объектива ее) на нек-рое расстояние относительно неподвижного объекта или 2) при
передвижении объекта (подвижным столиком) при неподвижной камере. Эти приемы обеспечивают полную стереоскопичность при съемке с отраженным светом непрозрачных объектов. При проходящем же свете, как это почти всегда имеет место в микроскопии, такое передвижение может оказаться недостаточным. Как указано выше, первенствующее значение здесь приобретает освещение конденсором; смещая оси освещения, можно полностью добиться необходимых различий между правым и левым снимками. На этом основании в своих новейших моделях микроскопов Цейс снабжает осветитель Аббе более значительным передвижением вправо и влево, к-рое отмечается на особой миллиметровой шкале. Для старых моделей он предлагает специальную «стереобленду для конденсора», позволяющую достигать того же эффекта (рис. 20).
|М. в лучах малых длин. Теория построения изображения устанавливает, что разрешающая способность микроскопа, т. е. способность различать наиболее мелкие детали, определяется двумя факторами: 1) величиной апертуры объектива и 2) длиной световой волны, в к-рой ведется наблюдение; т. о. объектив определенной апертуры дает возможность различать тем больше деталей объекта, чем короче световая волна. Величина действующего отверстия объектива для линз из стекла ,при лучших условиях практически не может превысить значения 1,4. В руках экспериментатора остается следовательно для повышения разрешающей способности микроскопа лишь одна возможность—вести работу в возможно более коротких световых волнах. Поскольку короткие волны соответствуют более темным цветам спектра, а фотографическая пластинка «видит» их более ярко и воспринимает даже невидимую ультрафиолетовую часть спектра, значение М. становится здесь особенно существенным. На практике субъективное
Рисунок 20.
наблюдение не может быть осуществляемо ниже пределов голубовато-синеватого цвета спектра, т. е. ниже 550 т/*. Употребление обычно прилагаемых к микроскопам синеватых стекол является с точки зрения повышения разрешающей способности фикцией, т. к. они пропускают целый конгломерат различных лучей. Наоборот, при М. бесцветных прозрачных объектов с большими тонкостями структур можно действительно «увидеть» значительно больше, но при условии применения М. в монохроматическом свете, т. е. в пучке лучей, возможно более однородных по длине. Это может быть достигнуто: 1) включением соответствующих светофильтров, пропускающих лишь узкий отрезок синего цвета (но такие светофильтры неизбежно будут очень темными, совершенно непригодными для субъективного наблюдения); 2) при помощи особой «ртутной лампы» для микроскопии (конструкция Цейса), к-рая дает прерывистый, линейный спектр; присоединяя к такой лампе даже сравнительно слабый прозрачный свето-
Рисунок 21.
фильтр, можно получить почти однородный пучок; 3) разложением сложного пучка спектроскопом. При применении основанных на этом принципе приборов, «монохроматоров», особенно в соединении с источником линейного света, получаются наилучшие результаты. Можно однако итти значительно дальше и производить съемки уже в невидимых лучах ультрафиолетовой части спектра. По конструкции А, Кёлера Цейсом был исполнен особый тип микрофотографич. установки в ультрафиолетовых лучах (рис. 21). Система состоит: 1) из сложных приборов для получения коротковолновых световых лучей (источником света является поток электрических искр высокого напряжения между кадмиевыми или магниевыми электродами); 2) оптической скамьи, на к-рой рас- положены коллектор, призма, разлагающая пучок, и призма, направляющая часть спектра в конденсор микроскопа; 3) микроскопа и 4) камеры. Все линзы, призмы, конденсор, объективы и окуляры сделаны из кварца, а не из стекол, к-рые непрозрачны для ультрафиолетовых лучей. Предметные и покровные стекла употребляются также лишь кварцевые. Объективы, в силу необходимости ■строить их лишь из однородного материала (кварца), являются «монохроматами», т. е. скоррегированы для лучей лишь определенной длины волны. Объект нельзя заключать в канадский бальзам, почему с этой целью употребляют воду, парафиновое масло, глицерин и др. Наводка на фокус чрезвычайно трудна, т. к. невидимое изображение нагцу-пывается особыми «искателями». Фотографии самого тонкого по структуре объекта— раковинки, водоросли «Pleurosiyma»— показывают изумительную разрешающую силу системы. Длина волны, в к-рой производится здесь съемка, равна 280 тц. Цветная М. При необходимости получить М. в подлинных цветах объекта, можно пользоваться как автохромным, так и трехцветным способами (см. Фотография). Главнейшим условием успеха здесь является подбор фильтров, соответствующих применяемым источникам света, так что трудный сам по себе трехцветный способ в рамках М. делается еще труднее; применению же несравненно более легкого автохромного способа поставлен при высоких увеличениях предел относительно крупным размером окрашенных крахмальных зерен, входящих в эмульсионный слой соответствующих пластинок. Качество негативного материала играет в М. весьма важную роль. Первое и важнейшее требование, предъявляемое к чувствительному слою,—это полная чистота его,т.к.нек-рые дефекты могут быть здесь не только неприятны, но и служить источником ошибок. Из всего сказанного выше о действии на эмульсию различных участков спектра вытекает далее желательность, а иногда и необходимость, пользоваться в случаях работы с многоцветными объектами орто-или даже панхроматическими пластинками. Чрезвычайно полезно далее, чтобы пластинки были противоореольны. Крайне вредные для ясности изображения ореолы сказываются особенно легко при наличии в объекте съемки больших разностей в интенсивности освещения, что как-раз часто имеет место в М. Опасность появления ореолов падает почти до нуля у пленок и специальных противоореольных пластинок, снабженных задерживающим актиничный свет слоем между эмульсией и стеклом (например пластинки Chromoisolar и Chromoisorapid Agfa), или на задней поверхности стекла. При необходимости и навыке можно пластинки последней категории приготовить и самому, нанося на их заднюю поверхность например раствор 50,0 аурина в 900,0 2%-ного коллодия с 100,0 теплого крепкого алкоголя и 4 см3 касторового масла или соответствующие продажные препараты. Подслои первой категории обесцвечиваются во время «обычной обработки пластинок; если того же не происходит с нанесенными на заднюю поверхность, то они или отделяются в воде перед проявлением или же их приходится удалять перед копированием. Пластинки большой чувствительности необходимо применять в М. лишь для съемок быстро движущихся объектов, в особенности при темном поле зрения. Во всех других случаях употребления таких пластинок в М. следует избегать. Чаще всего в М. работают с эмульсиями обычной, средней чувствительности (70—90шкалыВинна,10—12—Шейнера).При возможности делать более длительные экспозиции работа с малочувствительными пластинками типа репродукционных может быть крайне выгодна для получения тончайших деталей и оттенков, равно как и для получения особо сочных негативов. Теми же достоинствами отличаются при невысокой стоимости мокрые коллоидные пластинки, применение которых крайне ограничено однако неудобствами, связанными с тем, что эмульсия их сохраняет чувствительность лишь в течение 2—3 минут, пока она не высохла. Пластинки эти приходится поэтому готовить непосредственно перед употреблением, да и самое изготовление их требует значительной опытности и времени. Наконец эмульсия должна быть по возможности свободна от «химической» вуали, крайне неприятной и вредной при М. вообще. Пробу на наличие вуали можно сделать, погрузив часть сухой неэкспонированной пластинки в проявитель и продержав ее там в совершенной темноте столько времени, сколько обычно требуется при данном проявителе для выработки нормального негатива. При полном отсутствии вуали, после фиксажа никакой разницы между проявлявшейся и непроявлявшейся частями не будет; то или иное посерение проявлявшейся части укажет силу имеющейся вуали. Об определении экспозиции. Определение нужной при данных условиях для получения хорошей М. длительности действия света на чувствительную эмульсию, определение экспозиции является понятно также одним из важнейших условий успешности. Длительность эта, как и в обычной светописи, должна быть такова, чтобы наступающее после проявления почернение различных участков пластинки было пропорционально полученным ими от соответственных участков объекта съемки различным количествам света. Вне этих границ «верной экспозиции» почернения участков пластинки уже не будут соответствовать приводимым к ним количествам света, и М. следовательно не будет передавать свойственных объекту градаций плотности и цветности. Большинство важнейших из относящихся сюда фотохимич. законностей выясняется из рассмотрения т. н. характеристических кривых почернения пластинок. Чтобы построить такую кривую, отложим по оси абсцисс логарифмы экспозиций Е, равные Jt, т. е. произведениям из интенсивности света на время освещения. По оси ординат отложим плотности почернения D, равные логарифму отношения силы падающего на пластинку света к силе пропускаемого ею света, т. к. здесь, равно как и при других Г~!—1 / в \ / с / // -"/S \ logE Рисунок 22. фотохим. реакциях, действует лишь поглощенная энергия. Экспонируя участки пластинки при разных значениях Е, увидим на построенной указанным образом кривой (рис. 22), что при очень малых экспозициях сначала вовсе не получается никакого почернения (соотв. величины Е лежат ниже порога реакции). Затем кривая (средняя, В), поднимаясь весьма полого, дает вогнутый участок, переходящий в довольно длинный прямой отрезок; далее кривая также полого загибается в обратную сторону и начинает спускаться вниз. «Нормальной» экспозиции будет соответствовать прямой отрезок, в котором очевидно почернения пластинки будут пропорциональны произведениям Jt; начальный вогнутый отрезок ее соответствует «недодержке», верхний склоняющийся —- «передержке» и наконец опускающаяся часть— началу соляризации, могущей привести далее к получению вместо негатива прямо позитивного изображения. Следует иметь в виду, что численно равные произведения Л вызывают одинаковые почернения только при небольших колебаниях интенсивности и продолжительности действия света; при более крупных сдвигах их характер кривой может значительно измениться. При этом понижение интенсивности освещения может вызывать необходимость повысить длительность действия света в неожиданных для нас пределах. Практически передаваемые кривой взаимоотношения будут сказываться следующим образом на свойствах получаемых негативов. Ниже порога реакции (расстояние его от оси ординат характеризует «чувствительность» пластинки) мы не получим никаких следов изображения; при крайних недодержках будут получаться лишь слабые следы наиболее интенсивно светящих участков объекта, т. к. здесь лишь они, и притом лишь незначительно, перешли за порог реакции. При обычных условиях это—никуда негодные снимки, совершенно темные, с еле намеченными бликами наиболее светлых точек. При меньших степенях недодержек интенсивность почернения негатива в этих наиболее ярко освещенных точках значительно возрастает и может достигнуть большой силы; между тем за порог реакции успевают переступить еще лишь весьма ограниченные категории областей, освещенных менее ярко. В результате мы имеем крайне контрастные негативы (резко черные света и прозрачные тени) и позитивы с резкими белыми светами и крайне неудовлетворительной проработкой деталей во всех менее ярко освещенных участках, печатающихся все еще крайне темными. Далее следует прямая часть кривой, соответствующая «нормальной» экспозиции. О свойствах получающихся здесь негативов и отпечатков сказано уже выше. Участок этот имеет известную длительность и угол, под к-рым поднимается здесь кривая, может быть у разных пластинок различен. Кривая В, где угол а = 45°, относится к нормальным пластинкам, между тем как у жестких, контрастных пластинок угол этот больше (кривая А), а у мягких — значительно меньше (кривая С). В самом начале загиба кривой после прямого участка, следовательно-в самом начале передержки, мы получаем очень темные, сочные негативы, в которых начинают исчезать детали в светах, но тени еще достаточно прозрачны. В позитивах мы имеем с них также контрастные картины, но в отличие от контрастов недодержки негативы здесь в общем темны, позитивы в общем светлы, а контрастность создается лишь за счет исчезновения, сглаживания деталей в светах. Продвижение вверх по-склоняющейся кривой приводит к большим и крайним степеням передержки, характеризующимся уже падением контрастности: на самом деле в негативах интенсивность почернения в светах уже не только не повышается, но может даже падать (начало соляризации); в то же время менее интенсивно освещенные участки успевают послать соответствующим площадям пластинки столь значительные количества света, что в них достигается почти столь же интенсивное почернение. В результате получаем однообразно серые или черные негативы, дающие бледные, монотонные копии, лишенные всякой сочности и деталей. Наконец на вершине кривой мы будем иметь равномерное почернение всей пластинки. Учитывая все вышесказанное о значении тех или иных недостатков негативов, можно, изменяя экспозицию в противоположном направлении, подобрать нужную длительность чисто опытным путем на пробных снимках. При значительном навыке это-удается обычно довольно скоро, но и такая опытность не может иной раз избавить от необходимости потратить несколько пластинок. Лучше поэтому сразу дать на одну пластинку несколько различных экспозиций, постепенно выдвигая крышку кассеты каждый раз на 1—2 см и повторяя при этом одну и ту же экспозицию. Цейс снабжает свои большие установки особыми кассетами, делающими эту манипуляцию более удобной. Исключительные удобства представляют для быстрого и точного определения экспозиции особые шкалы—э к с п о з и т о-метры, доставляемые Цейсом и Рейхер-том при малых камерах с боковыми визирами (см. выше). Закладываемая перед пластинкой стеклянная шкала разделена на 7 участков. Крайний, обозначенный цифрой 100, является совершенно прозрачным стеклом; соседний, обозначенный цифрой 50, пропускает лишь половину света. Последующие участки, обозначенные цифрами 20, 10, 5, 2 и 1, затемнены последовательно настолько, что пропускают лишь х/5, 1/10» Уго> Убо и У100 света, получаемого при данных условиях ничем не прикрытой пластинкой. Пусть, поставив перед пластинкой экспозитометр, мы дали для пробы выдержку в 10 сек. и получили, проявив, лучший результат на полоске, обозначенной 5. Нам нужно следовательно сократить нашу пробную экспозицию в 20 раз или взять от нее? 5%, что составит Va сек- Пользуясь прибором, можно следовательно получить нужный ответ, допустив при пробе даже передержку до 100 крат; начинающие научаются относительно скоро не переходить этого предела или переходить его не часто несмотря на то, что в М. при весьма значительном количестве моментов, могущих влиять на длительность экспозиции, последняя может колебаться соответственно в весьма значительных пределах—от сотых долей секунды до многих минут. В длительности экспозиции заинтересовано в М. чрезвычайно большое количество факторов, притом только частично поддающихся точному предварительному учету. Экспозиция зависит конечно от силы и актиничности источника света, от того, насколько энергия его хорошо использована при помощи промежуточных коллекторов; от прозрачности фильтра и объекта съемки (толщина, окраска, цвет и толщина слоя бальзама или другой среды, толщина и цвет предметного и покровного стекол); от фокусного расстояния конденсора микроскопа (обратная пропорциональность); от увеличения (обратная пропорциональность квадрату); от апертуры объектива и конденсора (прямая пропорциональность) и разумеется от чувствительности пластинок. Ряд поддающихся предварительному учету факторов объединен Кёлером в формулы, по к-рым можно, имея хорошую М., сделанную с данного объекта на данной установке, получить путем расчета такой же снимок с того же объекта на той же установке и при любых других условиях. Однако расчеты здесь настолько сложны, что тем же автором предложена и построена Цейсом для выполнения их специальная логарифмическая линейка, пользование к-рой при наличии совершенного оптического оборудования представляет значительные удобства. Практически чаще всего приходится делать элементарные расчеты, изменяя растяжение камеры (прямая пропорциональность квадрату расстояния от задней линзы объектива до пластинки) и величину диафрагмы конденсора микроскопа (обратная пропорциональность квадрату ее диаметра). Проявители и проявление. Для проявления микрофотографий разумеется применимы все обычные проявители и правила проявления и можно получить безупречные снимки, пользуясь любым готовым проявителем. Однако при желании не упустить выгод, связанных с рациональным проявлением, надлежит иметь в виду следующее. 1) Употребляемые в настоящее время почти исключительно органические проявляющие вещества распадаются на две основных группы: быстрых (метол, амидол, ро-динал, пирокатехин) и медленных (глицин, гидрохинон, эйконоген, диоген), работающих раза в 2—3 медленнее первых. Повышение концентрации таких основных веществ в проявителе обусловливает большую контрастность негатива, понижение приводит к обратному. 2) Необходимым компонентом всякого проявителя является сульфит натрия (сернистокислый натрий), делающий легко окислимые растворы про- являющих веществ более прочными и растворяющий бромистое серебро; он нужен для разных проявляющих веществ в несколько различных количествах, даваемых рецептами; варьировать количество его, не изменяя концентрации основного вещества, не следует. В значительном избытке он вызывает крайне нежелательное укрупнение зерна негатива. 3) За исключением амидола все прочие органические проявители требуют подщелачивания рабочего раствора. Произведенное в начале проявления повышение щелочности ускоряет ход процесса и понижает контрастность негатива; однако, прибавив щелочи в самом конце проявления, можно вызвать обратный результат. Понижение щелочности ведет к увеличению контрастности. Выбор самой щелочи также не безразличен—наиболее нежные и богатые тонкими нюансами негативы дают щелочи углекислые, между тем как едкие работают грубее и резче; наиболее энергичной является здесь желтая кровяная соль. 4) Часто вводится в рецепт уже сразу нек-рое количество бромистого калия, без к-рого однако можно обойтись; замедляя проявление, он способствует повышению контрастности и чистоте светов негатива. Среди медленных проявителей заслуженной популярностью пользуется глицин благодаря своей способности применяться к более значительным ошибкам экспозиции, а среди быстрых—комбинация метола с гидрохиноном благодаря особому блеску и сочности даваемых ею негативов. Чтобы иметь возможность лучше всего использовать все указанные выше влияния изменения концентраций, лучше всего пользоваться рецептами, где основное проявляющее вещество с сульфитом отделено от щелочи; напр.: А) Воды дест. — 1 000,0; сульфита натрия — 100,0; глицина-—20,0 (полезно слегка нагреть при растворении). В) Воды дест.—500,0; поташа—100,0. Обычно для употребления берут 2 части А, 1 часть В и 2 части воды. Желая смягчить контрасты (при недодержке), берут А—1 часть, В—1 ч., воды—4 части. Для повышения контрастов можно взять А— 3 ч., В—1 ч., воды—1 ч. или работать совсем без воды. Можно добавить несколько капель 10%-ного раствора бромистого калия. Или, желая пользоваться гидрохинон-метолом, берут такой рецепт: А) Воды дест.—1 000,0; метола—5,0; сульфита натрия—100,0; гидрохинона—7,0; бромистого калия—2,5. В) Воды дест.:—500,0; поташа— 100,0. Для употребления обычно берут А— 3 ч., В—1 ч., воды—2 ч. Возможны все те же изменения в составе рабочей ванны, что и при глицине. При передержках добавляют по каплям 10%-ного раствора бромистого калия помимо содержания его в основном растворе. Существует несколько способов проявления. Простейший из них — проявление по времени, при котором, не следя за ходом проявления, держат пластинку в проявителе оптимальный для данного проявителя срок (напр. 4—5 мин. для гидрохинон-метола и 9—10 мин. для глицина). Способ этот приходится настоятельно рекомендовать при пользовании описанным выше экспозитометром; пользоваться им следует также при употреблении панхроматических и особо чувствительных^ пластинок, т. к. такое проявление нетрудно провести совсем без контроля при каком бы то ни было свете. Можно весьма рекомендовать этот способ также начинающим, т. к. однобразное проявление, не исправляя дефектов экспозиции, дает возможность и начинающему особенно ясно учитывать связь между ошибкой и результатом.—•Полной противоположностью к этой слепой манере является стремящийся исправить все дефекты экспозиции метод проявления в трех кюветах. Не подлежит сомнению, что он может и на самом деле оказать в этом отношении значительную помощь. Подготовляют заранее кюветы с нормальным, с медленным, но относительно концентрированным проявителем, и наконец с быстрым, но значительно разбавленным. Проявление начинают во второй кювете ; если изображение появится в нормальный для данного проявителя срок, то проявление заканчивается в первой ванне. Если появление изображения затягивается, то негатив переносится в третью кювету, но если он в ней проявится недостаточно интенсивно, то его возвращают во вторую. Наконец если проявление пойдет быстрее нормы, то его следует до конца вести во второй кювете и вести достаточно долго, не смущаясь интенсивным почернением: при передержке можно надеяться получить удовлетворительный отпечаток лишь с сильно проявленного негатива, который затем может быть улучшен последующей обработкой (см. ниже). Коротко проявленная передержка во всяком случае никуда не годится. Фиксирование М. не отличается никакими особенностями; почти всегда для фиксирования следует рекомендовать кислый фиксаж, напр.: воды—1 000,0; гипосульфита—250,0; кислого сернистокислого натра (бисульфита)—-20,0. В жаркое время полезны прописи с квасцами, например такая: растворяют 30,0 сернистокислого натрия в 100,0 воды; 2 ом3 чистой серной к-ты в 50,0 воды; 260,0 гипосульфита в 700,0 воды и смешивают в приведенном порядке. Исправление негативов. При некотором навыке значительное количество негативов , не дающих удовлетворительных копий, может быть весьма существенно исправлено последующей обработкой. Негативы, богатые деталями и чистые, свободные от вуали, но вялые и недостаточно плотные, можно усиливать напр. сулемой. Основательно промытые негативы отбеливаются в растворе: 500,0 дест. воды, 10,0 сулемы и 10,0 бромистого калия. После хорошей промывки чернение в 10%-ном водном растворе сульфита натрия и снова промывка. В этих случаях могут быть с успехом применены и многие другие усилители; к особо слабым, но безусловно свободным от вуали негативам можно рекомендовать применение особо мощного медного усилителя (пластинка средней силы будет столь значительным усилением совершенно испорчена). Перед употреблением сливают в равных частях растворы 12,0 бромистого калия на 500,0 дест. воды и 12,0 сернокислой меди на то же ее количество. В такой ванне идет отбеливание, как и в сулемовом растворе. Промывка водой должна длиться лишь 4 мин., после чего негатив чернится в 10%-ном водном растворе ляписа; основательная промывка. Ослаблением могут быть значительно улучшены негативы чрезмерно сильные, плотные, темные или вуалированные.. Наиболее популярным является ослабитель Фармера, состоящий из 10%-ного раствора гипосульфита натрия и той же крепости водного раствора красной кровяной соли (хранить в желтом стекле или в темноте), сливаемых непосредственно перед употреблением в различных пропорциях в зависимости от желаемого характера работы ослабителя. Если брать раствора красной кровяной соли 8— 10 ом3 на 100 см'А раствора гипосульфита, то ослабление пойдет (контролировать на свет, удобно работать в прозрачных кюветах) не слишком быстро и будет одинаково сказываться как в сильных, так и в слабых местах негатива. Такой состав ванны хорош тогда, когда не хотят значительно изменять характера негатива, следовательно он лучше всего подходит для ослабления лишь перепроявленных нормальных снимков. Там, где желательно повысить контрастность при передержках и при наличии вуали, лучше брать больше красной кровяной соли, до 15— 17 еж3 на 100 см3 гипосульфитного раствора. Процесс течет в такой ванне несравненно быстрее и по наблюдениям большинства авторов такая ванна действует ранее и сильнее на слабые места, чем и вызывается повышение контрастности и уничтожение вуали. После ослабления—энергичная и основательная промывка.—Еще более значительные недостатки могут быть исправлены комбинацией двух только-что описанных процедур, напр. в негативах с сильной вуалью и малоконтрастных из-за значительной передержки, когда ослабление, проведенное до нужной в смысле удаления вуали и устранения вялости степени, делает негатив уже слишком слабым, не способным дать достаточно сочного отпечатка. Обе операции должны быть разделены основательной промывкой.—Совершенно особое место и значение принадлежит в М. среди многочисленных способов усиления методике Фаворского, способной обнаруживать различия оттенков и коефициентов преломления, совершенно неразличимые глазом. Подобная возможность особенно важна при прижизненных исследованиях клеточных и в частности ядерных структур, часто вовсе не поддающихся непосредственному наблюдению. Сущность методики состоит в могущем быть при надобности повторенным неограниченное количество раз наращивании на крайне недодержанные (следовательно очень контрастные), но почти невидимые без добавочной обработки негативы пигментов со специальной пигментной бумаги или бромосеребряной эмульсии с недубленой бромистой. К сожалению методика сложна, требует большого навыка и безупречного негативного материала. Позитивный процесс при М. не отличается какими-либо существенными особенностями. Можно указать лишь, что здесь не могут найти применения бумаги и способы, связанные с поглощением деталей; напротив, в М. популярны глянцевые аристо-типные, бромистые, хлоробромистые и хло-росеребряные бумаги, способные к наиболее совершенной передаче всех подробностей негатива. Обращение с «дневной», печатающей видимым изображением аристотип-ной бумагой крайне просто и описывается в прилагаемых к пакетам наставлениях. Экспонирование, проявление и фиксация «ночных» бромистых и хлоробромистых бумаг весьма- сходно с соответствующей обработкой пластинок. Копируя негативы на «дневных» бумагах при рассеянном свете, работающий может влиять на характер отпечатка лишь в весьма малой степени, получая при более долгом копировании более темные, а при менее долгом—более светлые отпечатки одного и того же характера. Значительно понизить контрасты (что едва ли когда-либо выгодно в М.) может лишь копирование на прямом солнечном свете. Припомнив все, что было сказано выше о значении экспозиции в негативном процессе, мы сразу оценим возможности, связанные с пользованием «ночными» бумагами с проявлением. Варьируя экспозиции и подбирая более мягкие или жестко работающие сорта, мы имеем возможность значительно влиять на характер отпечатка в желательном направлении. Проявление всех трех групп относящихся сюда бумаг не отличается ничем существенно важным; однако каждая из них может потребовать значительных отличий в составе проявляющей ванны. Бромосеребряные бумаги проявляют теми же проявителями, что и пластинки, разбавляя их наполовину водой. Наиболее излюбленным является здесь гидрохинон-метоловый и амидоло-вый (перед употреблением добавлять на 100 см3 5%-ного раствора сульфита 0,5 амидола) проявители. Хлоро- и хлоробромо-серебряные бумаги обрабатываются более концентрированными проявителями, рецепты которых, хорошо подобранные к данному сорту, обычно приводятся в прилагаемых к пакетам наставлениях. Важной является далее возможность ослабить и усилить отпечатки «ночных» бумаг подобно тому, как то было описано для негативов. Для ослабления можно применить тот же рецепт Фармера, разбавив его двумя частями воды или прибавив к 10%-ному раствору гипосульфита лишь несколько капель крепкого раствора красной кровяной соли. При желании получить особо сочные копии можно преднамеренно несколько перепечатывать их и подвергать короткому ослаблению по толь-ко-что описанному способу. Усиливать отпечатки можно указанным выше суммовым усилителем. Применим и ряд других способов. Помимо «контактного» печатания в рамке на бромистых бумагах можно копировать, проецируя негатив на бумагу посредством увеличительных аппаратов. Среди последних наиболее распространены примитивные «конусы», работающие дневным светом, а также такого рода модели обычных проекционных фонарей, где источник света хорошо укрыт и не нарушает полной темноты лаборатории, служащей в данном случае кассетой для бромистой бумаги, укрепляемой кнопками перед фонарем после наводки на фокус на каком-либо белом экране. Чрезвычайно удобно пользование для этих целей большими микрофотографическими установками, располагаемыми здесь так, как то выше было описано для снимков при минимальных увеличениях. Негатив укрепляется при этом непосредственно перед большим коллектором, а бумага закладывается в кассету камеры (при надобности между стеклом и картоном). Необходимо конечно, чтобы негатив и проекция его на матовом стекле были освещены совершенно равномерно. Достигнуть этого легче, помещая где-либо ■ между источником света и конденсором матовое стекло, кальку или папиросную бумагу. Помимо возможности сделать той или иной степенью увеличения воспринимаемыми для глаза ценные подробности, таящиеся часто в хороших негативах (их полезно изучать с лупой), способ этот, давая работающему возможность манипулировать диафрагмой объектива, представляет вместе с тем и новые возможности влиять на контрастность копии: значительное диафрагмирование может действовать здесь подобно усилению . То же влияние окажут желтые фильтры той или иной плотности, к-рые можно вводить как здесь, так и при контактной печати на бромистых бумагах. Лит.: А р ь я к а с Г., Введение в фотографию, М.—Л., 1927; Блажин А., Микрофотография без специальных камер, Лаб. практ., 1927, № 6; Капустин В., Упрощенная установка при микрофотографировании, Новая хирургия, 1927, № 8; Кьяндский А., Методика микрофотографии, Журнал современ. хир., 1927, № 5—6; Лау-б е р т Ю., Фотографические рецепты и таблицы, М.—Л., 1926; он да е, Ошибки и неудачи негативного процесса и их исправление, Москва, 1927; он же, Бромистые бумаги, М.—Л., 1928; Решов Б.. Упрощенный способ микрофотографии, Клинический ж. Саратовского ун-та, 1927, № 3; Родионов В., К методике микрофотографии, Казанский медицинск-ж., 1929, № 1; Энглиш Е., Основы фотографии, М.—Л., 1927; Hay A., Photographisches Praktikum f. Mediziner u. Naturwissenschafter, В., 1930; К a i-s e г 1 i n g C, Die mikrophotographischen Apparate u. ihre Handhabung, Stuttgart, 1920; Kohler A., Mikrophotographie (Hndb. d. biol. Arbeitsmethoden, hrsg. v. E. Abderhalden, Abt. 2, T. 2, В.—Wien, 1927); он же, Mikrophotographie (Enzyklopadie d. mikro-skopischen Technik, hrsg. v.R.Krause, В. И, В., 1927); Pet erf i Т., Mikrophotographie (Hndb. der wis-senschaftlichen Photographie, hrsg. v. A. Hay, B. VI, T. 2, В., 1930); Rome is В., Mikrophotographie (Methodik der Wissenschaftlichen Biologie, hrsg. v. T. Peterfi, В. И, В., 1928). П. Живаго, В. Лебедев.
Смотрите также:
- MICROPHTHALMUS (микрофтальм), ненормальное уменьшение размеров глазного яблока, явно не гармонирующее с возрастом данного лица; всегда врожденное и б. ч. двустороннее изменение, нередко носящее се-мейно-наследственный характер. Степень М. может быть различна. Иногда ...
- МИНРОЦИТЫ, см. Макроциты. МИКРУРГИЯ. Содержание: Исторические данные............317 Аппараты (микроманипуляторы), инструментарий....................317 Общие приемы проведения микроопераций . ...
- МИКСОБАКТЕРИИ, или слизистые бактерии, встречаются на навозе животных, питающихся растительной пищей, на гниющем дереве и т. п.; в большинстве случаев образуют окрашенные в желтый или оранжевый цвет колонии. В развитии ...
- МИКСОМИЦЕТЫ (Myxomycetes, сип. My-xothallophyta), группа (тип или класс) низших организмов, занимающих промежуточ^ ное положение между растениями и животными и называемая поэтому также Myceto-zoa (грибы-животные). М. особенно характеризуются строением ...
- МИКСТУРЫ (от лат. misc ere—смешивать) (в рецепте обозначается сокращенно «mixt.»), жидкая лекарственная форма, прописываемая для приема столовыми, дессерт- ными или чайными ложками в количестве обыкновенно 100—200—400 г и состоящая из 2 ...