ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ, искусственные среды того или иного состава, предназначенные для культивирования микробов и простейших в лабораторных условиях. Впервые были введены для изолирования отдельных видов бактерий Р. Кохом в 1881 году, что создало базу для всей современной микробиологии и способствовало ее быстрому расцвету. Значение П. с. огромно: благодаря применению их имеется возможность не только выделить микроб в чистом виде, но и постоянно поддерживать его в культуре, в лаборатории, что облегчает его всестороннее изучение. Каждый микроб из числа изученных до наст, времени способен жить и размножаться в искусственных условиях на соответствующих П. с. Важное значение имеет реакция П. с. Рост и размножение микробов возможны при определенной кислотности (resp. щелочности) среды, пределы которой для большинства видов микробов довольно узки. Эта реакция П. с. устанавливается путем колориметрическим, электрометрическим или титрованием. Широко употреблявшиеся раньше в качестве индикатора лакмус и фенолфталеин вытесняются в наст, время другими, более чувствительными индикаторами, связаннцми с методом определения концентрации водородных ионов в среде. Для установления реакции П. с. по лакмусу испытывают ее на лакмусовую бумажку, синюю или красную, затем отмеривают 10 еж
3 среды в пробирку и, если реакция среды по лакмусу была кислой, то приливают в пробирку из бюретки столько п/
1й-ного раствора углекислой соды, чтобы капля жидкости, нанесенная на красную бумажку, вызвала лишь легкое посинение ее, т. е. чтобы реакция была нейтральной. Количество раствора соды, пошедшее для подщелачивания 10 ом
3 среды, перечисляют на общее количество среды и добавляют к последней; среду нужно после этого прокипятить и еще раз проверить ее реакцию. При некотором ндвыке можно установить реакцию среды, осторожно добавляя к ней 10 %-ный раствор соды или нормальный раствор NaOH.—При употреблении в качестве индикатора фенол-фталеина нельзя подщелачивать П. с. раствором соды, т. к. фенолфталеин обесцвечивается под влиянием выделяющейся при нейтрализации СО, (фенолфталеин употребляется в 0,5%-ном растворе в 50°-ном спирте). В слабощелочной среде (рН=8) фенолфталеин вызывает бледнорозовую окраску среды, при дальнейшем подщелачивании — покраснение, при более кислой реакции фенолфталеин бесцветен. Титрование производится п/
10-ным рас-
121 , ную воронку, простерилизованную и еще горячую , или через металлическую двойную воронку (содержащую между стенками горячую воду, см.
Воронка, рис. 10 и 11). Можно фильтровать агар, поместив колбу и воронку в Кохов-ский аппарат (при 100°). Иногда приходится прибегать к одному из методов просветления, ' среди к-рых наиболее употребительно просвет^ ление куриным белком: неС 1 литр П. с. при 50° прибавляют белок одного яйда, тщательно разболтанный в 100
cms холодной воды, смешивают со средой и после нагревания ее отфильтровывают хлопья белка, которые захватывают все взвешенные в П. с. частицы. Разливаются П. с. в стеклянную бактериол. посуду, предварительно простерилизованную сухим жаром. Разливка производится при помощи стеклянной воронки, нижний конец которой соединен каучуковой трубкой со стеклянным наконечником: на трубку надевается зажим. Для разливки агара - воронка предварительно прогревается. Стерилизация П. с. Мясопептонный бульон и агар стерилизуются в автоклаве при 120° в течение 20—30 минут. Другие, П. с. не выдерживают сильного нагревания. Желатина стерилизуется текучим паром в аппарате Коха (см?.
Коха аппарат) при 100° по 20—30 минут 3 дня подряд (дробная стерилизация). При применении. более высокой t° желатина теряет способность застывать при охлаждении. Среды с углеводами стерилизуются дробно текучим паром (3 дня подряд по 15 мин.), так как при более высокой темп, они легко изменяются. Некоторые среды (кровяная сыворотка) стери-' лизуются прогреванием при 56—-58° в течение 3 часов или фильтруются (для обеспложивания) через бактериальные фильтры (свечи), фильтры Зейца.—Готовые П. с. сохраняются в темном и прохладном месте, защищенном от пыли и высыхания. Лучше закрывать пробирки со средами (если они используются не сразу) резиновыми колпачками или заливать пробку парафином, а пробки колб накрывать бумажными покрышками. Свежие плотные П. с. обладают известной степенью влажности, что выражается между прочим в скоплении нек-рого количества «конденсационной» воды, образующейся при застывании, уплотнении, «конденсации» среды в нижних частях пробирки с плотной средой. Отсутствие конденсационной воды указывает на сухость среды. Сухие среды впервые предложены Дерром (Doerr, 1909). Обычным образом приготовленный агар разжижается, охлаждается до 50—-60° и разливается в большие сухие стерилизованные'чашки из прочного стекла. Агар высушивается в термостате при 37°; при разливке его тонким слоем высушивание происходит сравнительно быстро; через 12—20 часов питательная масса размельчается в порошок; среда хранится в металлической коробке. Перед употреблением порошок в определенном количестве смещивается с водой и нагревается в колбе. Сухие среды получаются путем высушивания и из жидких веществ. Приготовляются и сложные среды. В продаже имеются питательный агар, желатина, бульон, среды Дье-донне, Биттера, Эндо, Дригальского, Гаснера и др. Примеру Дерра последовали другие авторы, давшие свои рецепты приготовления сухих П. с. Так, Маркс (Marx) предложил заменять мясную воду Магги; исходя из этого, фирма Мерк приготовила рагит-агар, содержащий Магги, агар и цептон и представляющий соблй тонкий порошок; 42
г этого агара кипятится в
\Л воды в течение часа, затем фильтруется; получается среда, соответствующая 2%-ному агару. Прибавляя к 100 г обыкновенного агара или рагит-агара таблетку рагит-Эндо или ра-гит Дригальскогр, получают агар Эндо и
Дри-гальского-Конра^и среду (см.); имеются также рагит Барзикова (таблетки) и другие. Сухие среды Пиорковского (бульон, агар, желатина) представляют собой порошки следующего состава: 1) бульон: сухого пептона 10 г, углекислого натрия 0,25 з, Магги 12 ^з; 2) агар-: порошка агара 20
г, сухого пептона 10 г, углекислого натрия 0,05
г и Магги 12 г; 3) желатина: желатины 100 г, сухого пептона 10
г, углекислого натрия 0,05
г и Магги 12
г. Указанное количество взбалтывается в 1,л воды; смесь кипятится 1 час в Ко-ховском аппарате, фильтруется и стерилизуется. Кучинский и Фернер (Kuczynski, Ferner) предложили специальные сухие среды, поступившие в обращение под названием стандарт-I-бульон, стандарт-1-агар, стандарт-П-бульон и стандарт-П-агар (стандарты-1—для более и стандарты-П для менее прихотливых микробов) (фирма Мерк); способ приготовления составляет коммерческую тайну. Перед употреблением порошок растворяется в теплой воде и стерилизуется обычным способом; фильтрование излишне. Наконец Уленгут и Мессершмидт (Uhlenhuth, Messerschmidt) предложили пользоваться уже готовыми П. с, запаивая их в металлические коробки по типу консервов; преимущество таких консервированных сред в том, что в дополнительной обработке перед употреблением они не нуждаются. В СССР сухие П. с. изготовляются Институтом экспериментальной медицины в Ленинграде, но в широкую практику они пока не вошли.—Для выращивания микробов' применяются среды различного состава. Одни из них могут быть названы общими и употребляются в качестве ходовых в каждой лаборатории, другие имеют более специальное назначение и применяются для культивирования И диференцирования отдельных видов микробов. Общие П. с. могут быть по своему составу-разделены на белковые среды животного происхождения» (А), белковые, среды растительные . (Б) и среды безбёлковые (синтетические) (В). Наибольшим распространением пользуются белковые П. с, приготовляемые на мясе или его препаратах (экстракт и пр.).—А. Белковые среды. Главнейшей основой их является мясная вода и раствор пептона. Способы приготовления. 1) Мясная вода: мясо рогатого скота (для нек-рых целей лошадиное), очищенное от жира и сухожилий, пропущенное через мясорубку или мелко изрубленное, смешивается с двойным по весу количеством дест. или водопроводной воды, настаивается в течение 24 часов на холоду; затем жидкость пропускается через полотенце, остаток хорошо отжимается рукой или прессом. Мясной сок идет сейчас же на приготовление П. с. или для сохранения впрок стерилизуется в автоклаве при 120° в течение 20 минут, фильтруется, разливается по флаконам и снова стерилизуется. 2) 'О с н о в н о й раствор пептона: 100
г сухого пептона (Витте) и 50 з NaCl растворяются в 1 л дест. воды; затем прибавляется 1 г азотнокислого калия и 20
г кристаллической углекислой соды. 3) Основ но й раствор Готтингера (Hottitiger) получается путем переваривания мяса панкреатином и содержит высокоценные пептоны, полипептиды и аминокислоты. Среды, приготовленные на этом растворе, дешевле, так как к ним не нужно прибавлять дорогого пептона. Способ приготовления:
1 кг крупно нарезанного мяса опускают в 1,5
л кипящей воды, снова доводят до кипения, мясо вынимают и пропускают через мясорубку -По охлаждении. мясной отвар сливается в двухлитровую бутыль, прибавляется 1,5
г соды (Natr. carbon.), 3—5
г панкреатина (Рап-creatinum siccum) и 15 — 20 *г хлороформа (панкреатин можно заменить глицеринирован-ной поджелудочной железой). Содержимое бутыли хорошо встряхивается, в нее прибавляется измельченное мясо. Бутыль закрывают пробкой и хорошо встряхивают, придерживая пробку, чтобы ее не вытолкнули пары хлороформа. Оставляют при комнатной t° в течение 5 суток для переваривания (при 37°—2 дня), пока содержимое бутыли не превратится в прозрачную насыщенно желтого цвета жидкость с мелким осадком на дне; фильтрование, разливка, стерилизация при 120°—20 минут. 1. Мясные среды. 4) Агар м я с о -пептонный, см.
Агар-агар. Агаровые среды употребляются для выращивания бактерий на плоскости и уколом (см.
Микроорганизмы, культивирование микробов) в глубине агара (анаэробы). Для первой цели пробирки со све-же разлитым агаром укладываются под острым углом к плоскости для застывания агара в косом положении («косой» агар). Для посева уколом употребляется так наз. «прямой» агар„ застывший при прямом положении пробирки,. столбиком. 5) Агар глицериновый, 6) Бульон глицериновы й, £м. ниже специальные среды для туб. бацил, № 1 и № 2. 7) Бульон мясо-пептонный (см.
Бульон): I
л мясной воды,
1 10
г пептона, 5
г NaCl. 8) Б,у льон буферный:, вместо 5
г NaCl на 1 л мясной воды прибавляется 2-—3
г покупного фосфорнокислого натрия. 9) Бульон Либиховский (из Либиховского мясного экстракта): 10
г мясного экстракта, 10
г пептона. 5
г NaCl, 1 000
см3 дест. воды. Среды обычно несколько темнее, чем приготовленные на мясной воде, и несколько хуже для роста бактерий. Нек-рые экстракты могут содержать устойчивые споры и пептонизирующий фермент, что мешает свертыванию желатины, приготовленной на таком экстракте. 10) Бульон питательный Магги: 1 000
см3 дестилированной воды, 10
г мясного порошка Магги, 10
г пептона, 3
г NaCl. Кипятится 1 час в аппарате Коха. Остальное, как обычно. 11) Бульон Маг-t i п'а, применявшийся раньше почти исключительно для приготовления дифтерийного токсина, применяется теперь и для культивирования целого ряда микробов. Способ приготовления. а) Раствор пептона: из вымытых водопроводной водой и тонко измельченных свиных желудков (не менее 5) приготовляется следующая смесь, для самопереваривания: на 200
г кашицы 10 з чистой НС1 и 1 000 еж
3 воды 50°. Оставляют в водяной бане (или в термостате) при 50° в течение 12—24 часов (при этой темп. пепсин переваривает ткани лучше, переводя их в пептон). В кислой среде бактерии не развиваются. Затем нагревание в автоклаве
х/г часа при 100° (для разрушения пепсина), фильтрование через Сито, покрытое гигроскопической ватой, или через полотно. Перед тем как смешивать с мясной водой, раствор пептона по-
12» догревают до 80° и нейтрализуют, прибавляя 10%-ного едкого натра до легкого посинения красной лакмусовой бумаги (около 30
см3' на 1л). б) Мясная вода: 500
г изрубленного обезжиренного мяса (телятина) в 1 л воды настаивают в течение 20—24 часов (при 37°). Затем ' доводят t° до 50°, пропускают жидкость через полотно, отжимают и добавляют 5
г NaCl на' 1
л. Смешивают 500 г раствора пептона с 500 з мясной воды; подогревают до. 70° (в глиняной или фарфоровой посуде) в текучем паре; после нагревания пропускают через полотенце, доводят до нейтральной реакции, прибавляя на 1
л жидкости 7
смй нормального раствора NaOH. Стерилизация в автоклаве 20 минут при 120°, фильтрование через бумагу, разливка, стерилизация при 100° 3 дня по 20 минут. 12) Бульон Готтингера: основной раствор Готтингера разводится дест. водой в 3,5—10 раз (в зависимости от рода микробов), прибавляется 0,7% NaCl и 0,1% К
2НР0
4; кипятят, устанавливают реакцию, снова кипятят, фильтруют через бумажный фильтр, проверяют реакцию, разливают по пробиркам и стерилизуют в автоклаве (120°— 20 минут). 13) Желатина питательная, см.
Желатина. 14) Пептонна я, вода: 1%-ный раствор пептона (для анаэробов 2%-ный) или разведенный 1 : 10 дест. водой основной раствор пептона. 15) Пептонная вода с углеводами (среда Гиса) применяется для изучения ферментации углеводов бактериями. Состав: 1%-ный раствор пептона+0,4—1% того или- иного углевода [ара-бинозы, ксилозы, рамнозы (груцпа пентоз);
й-глюкозы, левулезы, галактозы (группа гек-соз); сахарозы, лактдзы, мальтозы, раффинозы (дисахариды); инулина, декстрина (полисахариды); глицерина, эритрита, адонита, маннита, дульцита, сорбита, инозита (многоатомные спирты)] и лакмусовой настойки до ясносинего окрашивания среды. Дробная стерилизация в текучем паре 3 дня подряд по 15 мин. 2. Среды с жидкостями организма. 16) Асцит-агар готовится, как серум-агар (см. ниже). 17) Асцит-бульон (асцитический бульон): стерильно взятая асци-тическая жидкость прибавляется к разлитому в пробирки стерильному слабощелочному бульону в отношении 1 : 2. Контроль на стерильность (жидкость можно предварительно про-стерилизовать прогреванием на водяной бане при 56° в течение 3 часов или профильтровать через свечу). 18) К р о в я н о й агар, см.
Кровь—кровь как питательная среда. 19) К р о -вяной агарТальмана:к 5—10
см3 слабощелочного агара, расплавленного и охлажденного до 45°, прибавляется 5 капель крови человека; смешение осторожным встряхиванием. 20) Бульон с кровью: кГготовому бульону прибавляется стерильно дефибрини-рованная кровь (барана, кролика и пр.) в количестве 5-—10%. Контроль на. стерильность. 21) Кровяная сыворотка сверну-т а я: стерильно взятая кровь лошади, рогатого скота, человека, кролика отстаивается, сыворотка стерильно отсасывается со сгустка, разливается по пробиркам и свертывается в косом положении в специальном аппарате Коха при 75—80°. Проверка на' стерильность в термостате при 37° в течение 24-—48 часов. Может быть употреблена сыворотка человеческая, оставшаяся после реакции Вассермана и снятая стерильно со сгустков; предварительно прогреть 1—2 часа при 58° на водяной бане. 22) Серум-бульон (сывороточный бульон) широко применяется для культивирования стрептококков, пневмококков и др. 23) Серум У агар (сывороточный агар> готовится прибавлением, при соблюдении всех правил асептики, к готовому слабощелочному расплавленному и охлажденному до 45° стерильному агару, разлитому по пробиркам,.
1/а—
1/
4 объема стерильной сыворотки; скашивается; контроль на стерильность. 24) Молоко, 25) лакмусовое молоко, см.
Молоко ■— молоко как питательная среда. 26) Ж е л ч ь, см.
Желчь—желчь как питательная среда. В качестве белковых жидкостей могут быть использованы также стерильно взятые жидкости hydrocele, плевральная и пр. 3. Яичные среды, см. .ЯгЦа —яйца. как питательная среда, и ниже—специальные-среды для туб. бацил. Б. Среды растительного происхождения. 1. Картофельные среды, см.
Картофель. 2. Дрожжевые-среды применяются для культивирования; грибков и требовательных бактерий (вместо серум-бульона); в последнее время удачно применены нек-рыми ин-тами СССР для приготовления вакцин (кишечно-тифозной группы) в= качестве заменяющих мясные среды и дающих. хороший выход микробов. 27) Бульон с дрожжевым
э*к страктом (вместо серум-бульона для требовательных бактерий):: 100
в пивных дрожжей размешиваются в-400
см3 дест. воды, подкисленной до рН—4,5, и кипятятся на огне через сетку при постоянном помешивании (10 минут). "После центрифугирования прозрачная жидкость разливается в колбочки и стерилизуется в текучем паре-или на водяной бане не более 10 минут. Этот-экстракт прибавляется к мясному бульону в.-количестве 5—10%. 28) Д р ожжевойагар для грибков: пивные дрожжи стерилизуются 1 час в Коховском аппарате и отстаиваются; к светлому фильтрату прибавляется-2% агара, он кипятится 1 час в Коховском аппарате, разливается по колбам и пробиркам
1-и стерилизуется в автоклаве обычным образом. 29) Дрожжевой регенерирован-ныйагардлявакцины:30д жидких пивных дрожжей, 60
л промытого ре/енериро-ванного агара, 150"г NaCl, 600 г сухого агара, кипятятся в автоклаве 30 мин. при 1 атмосфере. 30) Трагакант'овая среда разработана в 1930 г. лаборанткой Замковой (Москва)» в качестве частично заменяющей дефицитный-агар-агар: 20
г трагаканта+500
см3 воды оставляется на сутки для- разбухания, затем— фильтрование через марлю. На 1 л разбухшего-трагаканта берут 10 г сухого агара, дальнейшее,. как обычный мясо-пептонный агар. 31) Соевые сред ы—см.
Соя. В. Безбелковые'среды (синтетические) введены в бактериологич. технику еще со-времен Пастера, к-рый отметил, что дрожжи и? бактерии могут использовать азот аммиака. Кон (F. Colm) дал дальнейшую модификацию,. так наз. «нормальный питательный раствор для бактерий» следующего состава: 0,1 г фосфорнокислого калия, 0,1
г кристаллической сернокислой магнезии, 0,1
г трехосновной фосфорнокислой извести, 20
см3 дест. воды и. 0,2
г виннокислого аммония (источник азота-—аммоний и углерода—винная к-та).—В настоящее время существует ряд синтетических сред, пригодных для выращивания бактерий (см. табл.).
127 .
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ 128 Аспарагин и аспарагиновокислый аммоний
в них являются главными источниками азота. Стерилизация текучим паром в пробирках
(3 дня подряд по 15—25 мин.). Синтетические среды особенно охотно применяются для культивирования туб. бацил (см.. ниже). Галимар и Лаком (Galimard, Lacomme) прибавляют мочевину или.другие амины (аргднин, лейцин, тирозин, гликоколь) к раствору^ Содержащему 0,5% NaCl, 0,05% сернокислой магнезии, 0,2% глицерофосфорнокислой извести, 1,5% глицерина и углекислый калий до слабощелочной реакции.—Плотные безбелковые среды введены в практику Виноградским и Сулливаном. Безбелковая среда Роле.на (Raulin): 1 500
cms воды, 70 8 тростникового сахара, 4 з виннокаменной к-ты, 0,4
г азотнокислого аммония, 0,6
г фосфорнокислого аммония, .0,6
г углекислого калия, 0,4 з углекислого магния, ■0,25
г сернокислого аммония, 0,07
г сернокислого железа, 0,07
г. сернокислого цинка, 0,07
г кремнекислого калия, 0, 07
г углекислого марганца.
'
Специальные П. с, или среды особого назначения, применяются для выделения и культивирования определенного вида бактерий (но и другие бактерии могут на них хорошо расти). Среды,,на к-рых развивается только или почти исключительно определенный вид микробов, носят название элективных. Многие специальные среды применяются как диферен-циально-диагностические. I. Специальные среды для выращивания и диференцирования туберкулезных бацил. 1) А г а р глицерин о-в ы й—обычного приготовления мясо-пептон-ный агар с 4—5% глицерина. 2) Бульон глицериновый, обычного приготовления мясо-пептонный бульон (1% пептона и 0,5% NaCl) с 3—5% чистого глицерина; рН=6,8— 7,2 (применяется для массового получения туберкулина путем посева кусочка пленки туб. культуры на поверхность)'. 3) Бульон глицериновый Марморека: 0,5
кг телячьей •селезенки настаивается в 1 л воды 24 часа, кипятится 10 минут на голом огне, фильтруется, прибавляется 1 % пептона Шапото (Chapo-teau) и 0,5% NaCl (или одноосновного фосфорнокислого калия), фильтруется, устанавливается слабощелочная реакция 10%-ным раствором, соды, кипятится 25 минут в автоклаве, ■фильтруется, прибавляется 2—3% глицерина, разливается по колбам, стерилизуется в автоклаве при 115°. 4) Буль он г л и ц.е р и - новый Иохмана (Jochmann): к 3%-ному глицериновому бульону добавляется 5% питательного средства Гейдена (Heiden), стерилизация в текучем паре. 5) Картофель глицериновый по Анци-лотти (Anzilotti): клинья картофеля варятту ся в 6%-ном растворе глицерина (подщелоченном 1 %-ным раствором углекислого натрия) около
2 минут. При изменении при этом 'реакции жидкость снова подщелачивается. Клиньявкладываются в
1 -пробирки Ру, в расширения которых до перетяжки наливается 6%-ный глицериновый бульон или 5— 6%-ная глицериновая вода. Стерилизация в автоклаве 20 мин. при 120°. 6) Картофель глицериновый по Павловскому (способ приготовления, см.
Картофель); особого щелочения не требуется. 7) К а р т о ф е л ь с желчью (по Кальмету и Герену) готовится, как глицериновый картофель. Ломтики картофеля кладутся в стерильную бычью желчь с 5% глицерина и нагреваются на водяцой бане при 75° в течение 3 часов, затем переносятся в пробирки Ру, в к-рые наливают до перетяжки 5 %-ную глицёринированну ю стерильную желчь. Стерилизация 30 мин. при 120°. На э,той среде рост туб. бацил (typ. bovin.) обильный, влажный. 8) Картофель по Э с м а р х у (V. Es-march): круглые ломти картофеля (очищенного и вымытого) в 1
см толщиной и 4—5
см в диаметре помещаются в стеклянные двойные i чашки. Стерилизация в текучем паре. {^Картофельный бульон Водремера: 500,0 очищенного картофеля варится в 1 л воды, фильтруется. Установка нейтральной реакции (содой) по\лакмусу. Стерилизация
а/
2 часа при 120°; выдерживание 24 часа в термостате, декантация, снова стерилизация (применяется гл. обр. для изучения некислотоупорных рас туб. бацил). 10) Картофельный бульон Цехновицера — как предыдущий, с прибавкой 4—5% глицерина. 11) Картофельный бульон Юревича: тертый картофель заливают, двойным количеством воды, оставляют на сутки на холоду, встряхивают, отжимают через полотно. Отстаивают полчаса, сливают; к сливу добавляют равное количество мясной воды,
1 /
2% пептона,
1ji% NaCl, кипятят 1 час, фильтруют. Прибавляют 3% глицерина, устанавливают щелочную реакцию, стерилизуют (7
4—Va часа) в автоклаве, фильтруют, снова стерилизуют. 12) Среда Кумба-ри и13)средаДепень (Despeignes)—см.
Туберкулезные бацилы. 14) Мозговые среды Фиккера (Ficker): к мелко растертому свежему мозгу добавляют равный объем дестилированной воды, кипятят при постоянном помешивании
1/1 часа, пропускают через полотно, крепко отжимают, стерилизуют 2 часа под давлением. При прибавлении к мозговой кашице сыворотки ааи 3% глицерина (свертывание при соответствующей темп. в пробирках) получается плотная сывороточная мозговая среда; при прибавлении равной части 2,5%-ного агара и 3% Составные части Ушин-ского Вода........ Глицерин ..... Хлористый натрий К
2НР0
4 ...... Молочнокисл, аммоний Аспарагиновокислый натрий ......... Аспарагин....... . Хлористый кальций . . Азотнокислый натрии . Сернокислая магнезия . Лимоннокислая магнезия ........... Углекислый аммоний . 1 000
смз 30,0—40,0 5,0 2,0—2,5 6,0—7,0 3,4 0,2—0,4 СуЛли-вана 1000 сиз 10,0
£,о 1.0 0,5 10,0 0,2 0,2 Френкеля Проскау-ера и Века Локер-мана 1 000 сиз 5,0 2,0 4,0 Раствора NaOH до пспо щелочной реакции 1 000 с«з 15,0 (КН
аР0
4 1,3) 2,5 3,5 ■ 1 000 сиз 20,0 4,0 5,0 0,6 2,5 (NaH
?,P0
4 3,0) глицерина—мозговой агар (мозговая кашица кислой реакции, не нейтрализовать). 15) Среда сливочная Иванова и Суени (Evanoif, Sweany) для диференцировки бацил typ. hum. и bovin.—см.
Туберкулезные бацилы. 16) Среда Левенштейна с Kongoroth для выделения туб. палочек из крови—см.
Туберкулег-мые бацилы. 17)
VC p e д а Петраньяни (Pet-ragnani): картофельно-молочно-яичная среда •с прибавкой Malachitgrtin'a; хорошие результаты для выделения туберкулезных бацил (разница колоний различных типов туберк. бацил). 18) Яичная среда Безредка: жидкая •среда, состоящая из яиц и воды, подщелоченных 1%-ным раствором^углекислой соды (см.
"Туберкулезные бацилы) .19) Яичная среда Дорсета (Dorset) (подготовка яиц—см.
Яйца, яйца как питательная среда): содержимое яиц целиком выдувается в банку (с бусами), .прибавляется стерильная вода в количестве 10% по отношению к весу яиц, встряхивается до получения вполне гомогенной эмульсии (осторожно, чтобы не образовалась пена); •фильтруют через марлевую воронку (асептич-но), разливают по пробиркам. Свертывание при 70° в течение 2 часов, в наклонном положении, контроль на стерильность в термостате *(3 дня); сохранять под резиновыми колпачками. Среда особенно пригодна для выделения туб. ■бацил типа рогатого скота; человеческий тип на ней растет хуже. 20) Яичная среда .Л ю б е н а у (Lubenau): такой же способ приготовления (как среда Dorset), только берутся •одни желтки и вместо воды прибавляется равный объем 5%-ного глицеринового бульона нейтральной реакции (на 100
см3 бульона—
Ъ—6 яиц); среда разливается по пробиркам, 'Свертывание в косом положении при 85—.90° ((ставить чашку с водой в аппарат);-хорошо ра--стет туберкулезная палочка человеческого ти-:па. 21) Яичная среда Петрова (все приготовление стерильно): 250 з свежей телятины или говядины, пропущенной через мясорубку, заливается равным количеством 5 %-ной глицериновой .воды, настаивается в течение ночи на леднике, фильтруется через стерильную 'марлю; 2 объема смеси белка и желтка тщательно смешать, профильтровать через стерильную шарлю, смешать с 1 объемом (на 400 ел
3—200 <ди') мясной воды и на 100
ом3 этой среды при-••бавить 1
ем3 1%-ного спиртного раствора (95°) генцианвиолета. Хорошо смешивается и разливается по пробиркам. Свертывание в наклонном положении; первый день при 85°—30 минут; второй день при 75°—30 минут; третий .день при 75°—30 минут. Лиловый цвет среды выгодно выделяет растущие колонии; применяется для .выделения тубе ок. бацил из туберк. материала. Для пересевов применяется желтая -среда Пэтрова (того же состава, без краски). 22) Яичная среда Го н а' (Нопп): свежие ■яйца (очищенные, как в других методах) выпускаются целиком в банку с бусами, встряхиваются (без пены), переливаются в градуированный цилиндр; прибавляется
J/
3 объема 5%-ного глицеринового бульона (рН—6,2—6,4), смесь встряхивается, фильтруется через марлю, разливается в стерильные пробирки. Свертывание в косом положении, нагревая сначала на сильном огне до 80°, затем доводя на малом огне .до 87° и выдерживая при этой t° 30 мин. В каждую пробирку добавить после охлаждения •стерильно 0,8'
см3 кислого бульона без глицери-ша (рН—6,2—-6,4), надеть колпачки (залить. парафином); проверка в термостате в течение 48 часов. Сохранение на леднике. Среда имеет большое применение для выделения- туб. бацил из материала. 23) Г. ематиновая среда Гон а—видоизменение предыдущей среды: к яйцам прибавляется
1/
3 кислого 5%-ного глицеринового бульона и 3% раствора НЬ. Свертывание, как среды Гона. Хорошо растут палочки typ. bovin. 24) Свернутая кровяная сыворотка по Р. Коху, 25) свернутая сыворотка с 3% г)лицерина по Нокару и Ру (Nocard), способ приготовления—-см. Общие среды, № 21, Безбелковые среды для выращивания туб. бацил применяются с успехом. 26) Среда Сбтона (см.
Бактерии—бацила Кальметт-Герена) дает хороший выход туб. бдцил, больший, чем на глицериновом бульоне; специально применяется Кадьметом для выращивания BCG. 27) Среда Лонга, 28) среда Моделя (см.
Туберкулезные бацилы) применяются для приготовления безбелкового туберкулина. 29) Среда Левенштейна: 6 а фосфорнокислого аммония, 40
г глицерина, 1 000
см3 воды. 30) Среда М а с с о л я и Бретона (Massol, Breton): 1
л дест. воды, 1 з углекислой соды, 0,04 з сернокислого железа, 0,05
г сернокислой магнезии, 1
г фосфорнокислого калия, 8,5
г NaCl, 10 г глюкозы, 2заспарагина. 31) Среда Локермана, см. Общие среды—таблицу. 32) Среда Гей^ д е H-I/ е с с е (Heyden-Hesse): 5 з нутрозы Гей-дена растворяют в 50
см3 воды, затем добавляют 5 з NaCl, 30
см3 глицерина, 10—20 з агара, 5
см3 п/
10 раствора соды и 950
см3 воды. Кипятят 15 минут, фильтруют, стерилизуют при 115°, разливают в чашки Петри. П. Специальные среды для дифтерийных бацил: 1) Бу л ь о н м я со-пептонный, рН = 7,3—7,6. 2) Л е ф л е-ровская сыворотка: классическая среда для дифтерийных бацил (элективная): 3 части сыворотки (телячьей или бараньей, можно и лошадиной) +1 часть нейтрализованного бульона с 1% глюкозы; свертывание среды при 90— 95°; стерилизация 3 дня подряд при 80° но 1 часу. 3)-Уплотненная кровяная сыворотка (лошади, человека, быка)— см. выше Общие среды, № 21. На обеих средах дифтерийные палочки растут быстро (8—12 часов при 37°), тогда как рост сапрофитов значительно отстает. 4) С реда Дригальско-го и Бираста (Bierast): к 600
см3 бычьей сыворотки- прибавляется 174
см3 бульона с 1 % глюкозы и 26
см3 чистой бычьей желчи, фильтруется, разливается по чашкам Петри и свертывается при 90—95°, затем стерилизуется три дня подряд по 1 часу при 80°. Быстрый рост дифтерийных бацил при первом засеве. 5) СредадеКоста, Труазье и Доверия (de Costa, Troisier, Dauvergne): 100
см3 лошадиной сыворотки, 10
см3 стерилизованного 30%-ного раствора глюкозы, 30 капель концентрированной стерильной лакмусовой настойки, 3
см3 раствора серной кислоты (10
г на 1000) стерильной; свертывается в чашках Петри при медленном повышении темп, до 80° (1 ч. 15 мин.). На этой среде колонии дифтерийных палочек—-красные, дифтероидов—-серовато-белые. 6) Среда Роте (Rothe); основана на том же принципе: 90 частей серум-бульона (4 части сыворотки быка+1 часть нейтрализованного бульона) смешивается с 10 частями лакмусовой настойки, содержащей 10% сахара (глюкозы или левулезы), свертывается, как обычно, в чашках Петри. 7)СредаТи-ля (Thiel): 1,0
г пептона, 1
г нутрозы, 1 з глюкозы, 0,5
г NaCl, 5
см3 лакмусовой настойки, 100
см3 воды; при росте на среде дифтерийной палочки происходит ферментация глюкозы (в отличие от псевдодифтерийных банил), вследствие чего—покраснение и свертывание среды. Теллуровые среды основаны на способности дифтерийных бацил редуцировать соли теллуровой к-ты, вследствие чего колонии дифтерийных бацил окрашиваются в черный и серо-черный цвет. 8) Теллуровая среда Бифалько (Bifalco): а) белок разводят в 3 частях воды с прибавлением-0,5&и
3 раствора NaOH (1 : 10) и стерилизуют 15 минут при 115°; если хотят получить жидкую среду, то стерилизуют при 50—55° в водяной бане 3 дня подряд по 30 минут, б) Смешивают 75
см3 раствора белка, 25
см3 желтка и 2
см3 1%-ного стерильного раствора Kal. tellurosi. Нагревают 2 дня подряд по 30 минут при 50—55°, а на третий день свертывают. 9) Теллуровый агар Конрад и и Троша (Conradi, Troch):' 1%-ный сахарный (глюкоза) бульон [10
г мясного экстракта, 5
г NaCl, 20
г пептона Витте и 6 г Calc. bimalici (двуяблочный)] смешивается со свежей сывороткой быка в отношении 1 : 3; к 100
см3 смеси прибавляется 2
см3 1%-ного раствора теллуровокислого натрия; разливается по чашкам Петри, свертывается при 85°. Колонии дифтерийных палочек черные вследствие редукции теллура. 10) Теллуровая среда Перголы (Pergola): 50
см3 сыворотки, 50
см3 0,8%-ного раствора NaCl, 2
см3 1%-ного раствора теллуровокислого калия, 1 желток; свертывание в чашках Петри при 85—90°. 11) Г л и ц е- р и н о в ы й кровяной агар Мандельбаума и Гейне м а н а (Mandelbaum, Heinemann) с 5 % глицерина; поверхность смазывается стерильной человеческой, кровью; гемолиз—дифтерийные бацилы. 12) Среда Энгеринга (Engering) с олеиновокислым натрием для диференцирова--ния дифтерийных бацил; последние на этой среде не растут, дифтероиды дают хороший рост. К 20
см3 расплавленного агара прибавляется при сильном встряхивании 0,4
'см3 10%-ного раствора олеиновокислого натрия и разливается в чашки Петри. 13) Среды для получения дифтерийного токсина: а) очищенное от жира и сухожилий мясо пропускается через мясорубку; 1
кг заливается 2
л воды, добавляются дрожжи, смесь ставится на ночь в теплое место. Сахар мяса пере-браживает и разлагается. Настой фильтруется через полотно, к нему добавляется 2% пептона Витте или Шапото и 5,0 г NaCl иди равная часть пептонного раствора, приготовленного по способу Мартена из свиных желудков. Среда стерилизуется 45 минут при 120°, фильтруется, нейтрализуется по лакмусу (рН=872—8,4); прибавляется кроме этого на 1
л 7
см3 нормального раствора соды, стерилизуется 20 мин. при 120°; фильтрование, разливка в плоские колбы тонким слоем (3
см). б) 1 л телячьей мясной воды, 20
г пептона, 3
г NaCl,
2-е Natr. phosph., несколько кусков мрамора или одна ложка мела, 1
г тростникового сахара (глюкозы). III. Специальные среды для ки-ш е ч н о-т ифозной группы имеют общий основной принцип: способность Bacterium coli разлагать некоторые углеводы, особенно лактозу, в противоположность тифозной палочке и другим патогенным микробам этой группы,. показателем чего является изменение цвета среды, содержащей тот или иной цветной индикатор (цветные среды); кроме того используются различные вещества, действующие задерживающим образом на сопутствующие бактерии, гл. обр. на Bact. coli. Пределы рН для тифозной палочки = 6,2—7,6; opt.—рН = 6,8— 7,2. 1) Среда Конрад и-Д ригальс кого— см.
Дригалъского-Конради среда, а) Модификация: 100
см3 мясопептонного агара (2—3%-ного), 1,5 г молочного сахара, 5
см3' лакмусовой настойки, 1
см3 1°/00-пото раствора Krystallviolett В. Hochst б) На 2
л мясной воды 20 г пептона Витте, 10
г NaCl, 20 г нутрозы, 60. г агара, 300
см3 лакмусовой настойки, 30
г лактозы, 20
см3 1°/
00-ного раствора водного Krystallviolett'а. Тифозная палочка, бацилы паратифа, дизентерии дают бесцветные или голубоватые колонии, кишечная палочка-^-красйые. 2) Среда Эндо, (Endo): 1 000
см3 мясопептонного (3 %-ного) агара, рН 7,5; 15,0
г молочного сахара (химически чистого), 5
см3 спиртового насыщенного р'аствора фуксина, 25
см3 10%-ного водного раствора Natr. sulfu-rosi (серноватистокислого натрия). Среда.должна сохраняться в темноте. Колонии тифозной_ палочки, паратифа и дизентерии через 24 часа' бесцветны,-через 48 часов—розовые; колонии. Bact. coli через 15 часов розовые в центре, через 24 часа—красные. Среда Эндо вместе с предыдущими наиболее употребительна для тифозно-кишечной группы. 3) Кофеин-ф у к'с и н-а гар Гетгенса (Gaehtgens)— агар Эндо с прибавлением 0,33% химически чистого кофеина. Рост кишечной палочки задерживается, тифозной палочки нет. 4) Агар с мал,ахитовой зеленью Ленца и Тица (Lentz, Tietz) (для тифа и паратифа); задерживает рост кишечной палочки и других щелочеобразователей, бацилы тифа и паратифа растут на 1-й день в виде мелких колоний, позже (2—3 дня)—хороший рост. Нейтральный 2—3%-ный агар с 2% пептона (рН—7—7,2) + водный раствор (1 : 60) Malachitgriin (Hochst} (1
см3 на 100
ем3). Количество краски устанавливается эмпирически для данного, агара. 5) Агар Падлевского: к 3%-ному мясопептонному агару (2% пептона) слабощелочной реакции прибавляют 1% химически чистого молочного сахара и 3% бычьей желчи (прокипяченной и профильтрованной). Стерилизация при 100° 2* дня по 30 мин. Отдельно' растворы: а) 1 %-ный- водный раствор кристаллической химически чистой малахитовой зелени (cryst. chem. pur. Hochst); б) 10%-ный водный раствор Natr. sulfurosi. На 100
см3 агара (расплавленного и остуженного до 60—70°) прибавляют 0,5
см3 раствора (а), 0,75—1,0
см3 раствора (б) и 0,5
см3 стерилизованной желчи. Желчь благоприятствует росту (обогащение) тифозной палочки; последняя, паратифозные и дизентерийные бацилы дают сначала бесцветные, затем золотистые колонии, Bact. coli—зеленые-колонии (разложение молочного сахара с образованием кислоты). 6) Chinabla u-M a 1 а-chitgrun-arap Биттера (Bitter) содержит 1% пептона Витте, 0,5% NaCl,.2% молочного сахара, 12%-ный раствор China-blau Hochst (8 капель на 100
см3) и малахитовую . зелень, кристаллическую, химически чистую (2,5
см3 0,1 %-ного раствора на 100)..
Ji--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- Тиф и паратиф—бесцветные прозрачные колонии, Bact. coli—синие, Proteus и Руосуа-neus-—тоже бесцветные, но менее прозрачные. 7) Агар с конгорот Л и берма на и, А с е л я (Liebermann, Acel): на 100
см3 3 %-ного слабощелочного мясопептонного агара (1% пептона, 1% нутрозы, 0,5% NaCl) берется 1,5 г химически чистой лактозы и 30
см3 1%-ного водного раствора конгорот. Колонии тифа, паратифа, дизентерии и холерных банил—красные, Bact. coli-—черные. 8) Среда Ш м и ц a (Schmitz) — серум конгорот-агар, среда такого же состава, как предыдущая; серум-агар готовится из сыворотки и отвара кровяных сгустков (с бойни). Можно прибавить кофеин, который задерживает рост Bact. coli. На этой среде колонии тифа, паратифа, дизентерии (Shiga и Флекснер)—сухие, плоские, тёмнокрасные; Bact. coli—темносиние на красном фоне. Очень хорошая среда. 9) Среда Лефлер-Шустера (Schuster): Malachitgriin-Reinblau-Safranin-Agar: на 100
см3 агара—3
см3 бычьей желчи, 1
см3 0,2%-ного водного раствора сафранина (rein; Grubler), 3
см3 1%-ного водного раствора Reinblau doppelt konzentr. (Hochst), 3—4
см3 0,2%-ного водного раствора малахитовой зелени (Malachitgrim-Chlorzink-Doppelsalz; Hochst,). Среда-—лилово-голубая; тифозные палочки—голубые колонии, тонкие, неправильные, с металлическим оттенком, паратиф В—то же, паратиф А—круглые, прозрачные колонии, голубоватые, без металлического блеска, группа Гертнера и coli—розовые и красные колонии. 10) Среда Гаснера (Gassner) с вассерблау и метахромгельб [на 200
см3 агара 17,5,&м
3 10%-ного раствора вассерблау (с 10
г лактозы) и 12,5
см3 2%-ного водного раствора метахромгельб]. Среда задерживает рост спороносных палочек и кокков, кишечная палочка—темно-синие колонии, тифозные и дизентерийные— желтые. 11) Среда Мюллера (Muller): элективная среда для тифозных бацил, содержит Eisen-Kalium-Tartrat, фенол, лактозу, железистосинеродиСтый калий, соду. Бацилы тифа—оранжевые колонии на коричневом фоне среды, Bact. coli—синие; Среда дает более показательные результаты, чем Эндо и Конради-Дригальского. 12) Среда с бриллиантовой зеленью (Brilliantgrun-agar): 1
л нейтрального мясо-пептонного агара, 8 ел»
3 раствора бриллиантовой зелени 1 : 100, 13,2
см3 раствора пикриновой к-ты. Свежая среда задерживает рост Bact. coli. 13) Кофеиновый бульон Фиккера (для накопления тифозных бацил): 100
см3 мясного бульона (3% пептона)+ 0,6
г чистого кофеина, 0,7
см3 раствора кристаллвиолетт (1 : 1 000). Следующие среды являются диференциальны-мидля rpyrnibityph.—paratyph.— coli—dysenter , т. е. служат гл. обр. или исключительно для этой цели .14) Лакмусовая молочная' сыворотка Петрушки (Lackmusmolke Petruschky) (см.
Молоко, молоко как питательная среда)-—одна из основных сред для дифе-ренциации бацил тифа, паратифа, coli и дизентерии. 15) Лакмусовая искусственная молочная сыворотка Зейца— ценная замена сыворотки Петрушки: 20
г химически чистой лактозы, 0,4
г глюкозы; .0,5
г двуосповного фосфорнокислого натрия, 1 з фосфорнокислого аммония, 2
г лимоннокислого натрия (трехосновного), 5
г NaCl, 0,05
г сухого пептона Витте, 0,25
г азолитмина (Kahlbaum), 1000
см3 дест. воды. 16) Лакмусовое молок о—см.
Молоко, молоко как питательная среда. 17) Среда Барзико-в а I: в воде растворяется 1% нутрозы, 1% глюкозы, 0,5% NaCl и добавляется 10% лак^ мусовой настойки (Kahlbaum). Bact. coli и parat. дают покраснение, створаживание и газообразование; Bact. typh. и dysenter.— покраснение и помутнение, Вас. faecalis alcaligenes—голубое окрашивание. Для лучшего уловления газа в пробирки опускается поплавок. 18) Среда Барзикова II—такого же состава, но вместо глюкозы—лактоза; Bact. coli—такое же изменение, как I; typh. parat. и дизентерии—среду не изменяют. 19) М а н-н и т-н у т р о з а-л акмусовый раствор Д е р р а для диференциации бацил группы дизентерии. 20) Мальтоз а-н у т р о з а-лакмусовый раствор Геча (Hetsch), то же. 21) Среды Гиса (Hiss) с различными углеводами и лакмусовой настойкой (или другим индикатором)—см. Общие среды. 22) Двойной сахарный агар Рес-сел я (Russell): 100
г питат. агара, 0,1
г глюкозы, 1,0 г лактозы, лакмусовая настойка; рН— 7,3—7,4; для диференциации бактерий группы: a) Bact. coli разлагает оба сахара с к-той и газом; б) группа паратифов и энтерита раз-' лагает глюкозу с к-той и газом; не разлагает лактозы; в} тиф и дизентерия разлагают глюкозу без газа, не разлагают лактозы; г) группа гделочеобразователей не разлагает ни лактозы ни глюкозы; цвет не изменяется. 23) Н е й-т р а л ь р о т-б ульон Бессон а, Ранка и Сенеза (Besson, Ranque, Senez): 1
л мясной воды слабощелочной реакции, 4,0 г глюкозы и 3
см3 1 %-ного водного раствора неитральрота; среда разливается в пробирки с поплавками (Durham, Asch). 24) Среда Омелянского: обычный бульон +
x/s% муравьинокислого натрия (проверить реакцию) и !/я% насыщенного водного раствора Neu-tralroth. Разливается в пробирки с поплавками. Стерилизация в текучем паре. Изменение среды под влиянием роста бактерий группы— см. среду Р)6тбергера (Rothberger). 25) Среда Ротберге,р а—агар с виноградным сахаром и нейтральротом: мясопептонный агар (0,75%-ный)Н-0,3%виноградн,сахараи1%вод-ного насыщенного на холоду (профильтрованного), неитральрота; Bact. coli—зеленая' флюоресценция , газ и обесцвечивание среды (желтая), тиф и дизентерия-—малиновая окраска среды, паратиф А—к-та и немного газа, среда малиновая, легкая флюоресценция, паратиф В— флюоресценция, газ, среда оранжевая; щело-чеобразователи не изменяют среды. 26) Г л и-ц е р и и-ф уксиновый бульон Штер-н a (Stern) для диференциации в группе паратифа В (Вас. Schottmulleri и Вас. enteritidis Gart-neri—покраснение через 3 дня как исключение, В. Breslau—покраснение, Bact. suipestifer— не изменяет). 27) Сыворотка с рамнозой Биттер-Вейгмана и Габса (Bitter-Weigmann, Habs) для диференциации бактерий группы паратифа; индикатор—метилрот, В. Breslau— среда красная (отщепляет от рамнозы больше кислот); В. Schottmulleri—среда желтая; то же В. enteritidis Gartneri и В. suipestifer. 28) Р а-мноза-эндо-агар для той же цели (рамноза, син.изодульцит).29) Лакмусовый молочный агар Дригальского для диференциации тифа, паратифа, дизентерии, Вас. faecalis alcaligenes—голуб, рост, coli—красный. у
13S IV. Среды для холерных вибрионов (opt. pH—7,0—7,4): 1) 1%-ная пептонная вода. 2) Кровяной агар Дьедонне (Dieudonne): 30 частей щелочной крови, 70 частей агара; содержит большое количество щелочных альбуминатов; вследствие этого создаются благоприятные условия для роста холерных вибрионов и задержки размножения других кишечных бактерий. Хорошо развиваются Вас. pyocyaneus и некоторые кокки, их легко отличить по виду колоний.—3) СредаМолдована (Moldovan): те же составные части, но в отношении 1 : 4 (10+40). 4) Агар Пилона (Pi Ion): 30 частей щелочной крови (сода) и 70 частей нейтрального агара. 5) Среда Кабешима (Kabeshima): агар с гемоглобиновыы экстрактом Пфейфера и углекислым натрием. 6) Г с-моглобиновый агар Эша (Esch.): 15
см3 нормального раствора едкого калия, 15
см3 дестклироваиной воды, 5
г гемоглобина, 170
ем3 нейтрального 3%-ного агара. 7) Щ е -лочная среда Krumwiede: яйца, кристаллический углекислый натрий, мясо-пептонный агар. 8) Среда Теруушии X и д a (Teruuchi, Hida): а) казеин-трипсин-пептонная 4—5%-ная вода, прекрасная среда для холерных вибрионов; б) агар с 4—5% казеин-трипсин-пептона, щелочной реакции; растут только холерные вибрионы. 9) Среда Аронсона (Н. Aronson); с фуксином и тростниковым сахаром, сильно щелочной реакции (Natr. carbon.), вследствие чего остальные бактерии (coli) почти не растут; тростниковый сахар благоприятствует росту холерных вибрионов. 10) Среда Гессе (Hesse) с малахитовой зеленью и тростниковым сахаром. 11) Среда Кодама и Такеда (Kodama, Takeda): пептонная вода с крахмалом (картофельным); предложена для диференциации вибрионов, дает недостаточно четкие результаты. 12) Желчная среда Оттоленги (Ottolenghi): на 100
см3 свежей бычьей желчи (фильтруется через бумагу) берется 3
см3 следующего раствора: 10 г углекислого натрия, 0,1
г азотнокислого калия (селитра), 100
см3 дест. воды. Стерилизация в автоклаве 20 мин. при 115°. Способ накопления для первого посева, очень хорошие результаты. 13) Минеральная среда К е м а л ь-М у х т а р а (Kemal-Moukthar): 0,8 г фосфорнокислого натрия, 0,4 г аспарагина, 0,6
г молочнокислого аммония, 0,5
г NaCl, 100
см3 дест. воды; при первом посеве из faeces холерный вибрион быстро (5—б часов) дает почти чистую культуру; другие кишечные микробы значительно отстают в росте. 14) Среда для индола Б у й в и -да (Bujwid)—см.
Холера. V. Пи тательные среды для палочек Пфейфера. Палочки Пфейфера лучше всего растут на средах с кровью и на витаминовых средах; рН границы—6,2—7,6; opt.—7,0; opt. t° 37°. Рост через 18—24 часа в виде мелких колоний,«капли росы»; на среде Ле-винталя колонии слегка мутноватые. 1) Агар с 5% дефибринированной крови в чашках (2 дня «созреть»). 2) Агар Левинталя(с вареной кровью) (LeVinthal): 2%-ный мясопептонный агар, рН 7,3—7,'5, расплавленный и остуженный до 60°, смешива-/ ют в колбах (медленно) с 5% крови (стерильной дефибринированной человеческой, лошадиной и пр.). Среда кипятится на горелке с асбестовой сеткой (или в Коховском аппарате) не бо- лее 5 минут при 1 л и 8—10 минут при 2
л. Цвет агара темнеет. При начале закипания снять и повторить процедуру еще раз (не перегреть). Асептично профильтровать при 60° через вату или отсосать пипеткой прозрачный агар после отстаивания при 60°. Разлить по пробиркам столбиком. Перед употреблением скосить (на 1—2 мин. погрузить в кипящую воду). Хранится 2—3 недели. 3) Агар кровяной Пфейфер а—по поверхности готового косого агара (1—17
2%; рН—7,3—7,5) спускают или размазывают немного свежей, стерильной крови (контроль в термостате 24 часа). 4) Агар витаминовый Легру (Legroux): обычный агар с 5—10% кровяного экстракта (кровь, разбавленная в.4 раза физиологическим раствором, греется 15 минут при 80°, стерильно фильтруется и пропускается через свечу). 5) Шоколадный агар по Voges'y:,K кипящему агару прибавить 15% лошадиной или кроличьей крови, смешать и тотчас же снять с огня. Когда агар остынет до • 50—60°, тщательно разболтать темный осадок, разлить по чашкам или в пробирки (скосить). Среда Эвери (Avery); агар с олеиновокислым натрием (задерживает рост стрептококков и пневмококков): а) витаминовый 2%-ный агар (рН—7,0—7,2); б) 2%-ный водный раствор олеиновокислого натрия (стерилизуется в автоклаве); в) дефибринированная кровь человека или кролика (отсосать сыворотку и долить до первоначального объема фи-зиол. раствором или бульоном); г) к 94
см3 агдра (90°) прибавить 5
ом3 2%-ного раствора олеиновокислого натрия и 1
ом3 взвеси эритроцитов. VІ. Для палочек коклюша (Bordet-Gengou). Растут на кровяных средах в виде очень маленьких беловатых колоний. 1) А г а р кровяной обычный. 2) Агар картофельный кровяной Борде-Жангу: а) 100 г нарезанного ломтями картофеля варится в 200
см3 глицериновой воды (4%) при 120° 30 мин.; жидкость отфильтровывается и отжимается через полотно; б) 5 г агара растворяют в 150
см3 0,6%-ного раствора NaCl. К 150
см3 агара (б) прибавляют 50
см3 жидкости (а), разливают в пробирки по 2—3
см3 и стерилизуют в автоклаве при 120°. Перед посевом (накануне) в каждую пробирку агара (расплавленного и охлажденного до 50°) прибавить 1,5^3
см3 дефибринированной крови человека или кролика. Осторбжно перемешать, охладить в косом положении, надеть резиновые колпачки и поставить на сутки при 37° для 'проверки. Рост через 24—48 часов (гемолиз). VІI. Среды для менингококков; opt. t° 37°, ниже 22° не растут; строго в аэробных- условиях. Для первых генераций необходимы среды с кровью или другой белковой жидкостью. С 2—-3 генераций растут на обычных средах. 1) А с ц и т-б у л ь о н: 2—3 части бульона + 1 часть стерильной асцитич. жидкости, содержащей не менее 5 а альбуминов на 1 л; помутнение и образование небольшого нежного осадка на дне. К концу 3 суток нежная, хрупкая пленка. 2) Асци^-агар или серум-агар: агар расплавленный и остуженный+
1/* объема асцитич. жидкости или сыворотки (3 +1)-3) А с ц и т-а г а р или серум-агар Цейсле-ра и Риделя (Zeissler, Riedel), то же +2% глюкозы к агару. 4) Кровяной асцит—■ мальтоза - агар — среда Зша (Esch): 60
см3 пептонного агара, 20
см3 стерильной де-фибринирован. крови барана, 10
ем3 асцитич.
1S8 жидкости, 1
г мальтозы, распущенной в 3
см3 бульона. Рост быстрый. 5) Агар в и т а м и-п'о в ы й: 500
г свежего бычьего сердца, 15
г пептона, 5
г NaCl, одно яйцо и 500
см3 водопроводной воды. Нагревание при темп., щадящей витамины, на голом огне или водяной бане при постоянном помешивании, пока цвет массы сделается бурым (68—-70°); жидкость процеживается через густое сито или сетку (не через холст, вату или бумагу, т. к. это задерживает витамины). Отдельно, растворяют 15 в агара в 500
см3 водопроводной воды, нагревают до 70° и добавляют к первой смеси. Стерилизация в автоклаве при од*юй атмосфере в течение 30 минут, затем оставить до следующего дня. Вынув из кастрюли застывшую массу, срезают нижнюю мутную часть с осадком. Прозрачную часть растворяют, разливают по пробиркам и стерилизуют в автоклаве. 6) Агар с чело веческой кровью (Ш отмюлле-ра) и с виноградным.сахаром (Цейелера и Риделя): мясопептонный агар (остуженный до 45°) + 20% стерильно взятой человеческой крови+ 2% виноградного сахара. Диференциальная среда для отличия от Micrococcus catarrhalis и Micrococcus pharyn-gitidis; колонии всех видов круглые, немного возвышенные, серо-фиолетового цвета; консистенция у менингококков напоминает густое картофельное шоре, у других колонии снимаются со среды целиком. 7) Агар кровяной обыкновенный 10%-ный. 8) А г а р г е-моглобиновый Кедровского; пропущенный через мясорубку человеческий послед настаивается сутки с 3—4 объемами воды, фильтруется через свечу. Фильтрат сливают аа со стерильным 2%-ным агаром. ,9) А г а р плацентарный Кучера (Ku'tscher): мацерация 500 з свежих пляцент
в 1 л воды; прибавляют: 2,5% агара, 0,5% NaCl, 1% глюкозы, 2% нутрозы, 2% пептона Шапото. К 3 частям этого агара, слабо подщелоченного и стерилизованного, прибавляют 1 объем инактивиро-ванной (при 60°) бычьей сыворотки. 10) Б е й л и среды (Beily): а) гормонный аг ар: 15
г агара (тщательно промытого) растворить
в1 л воды, остудить до 50-—60°, прибавить 500
г умеренно измельченного сердца или селезенки быка. Довести до кипения и варить на слабом огне 15—20 минут. Повторно профильтровать через редкое сито. Прибавить 10
г пептона и 5
г NaCl, предварительно растворенных в небольшом количестве дест. воды. Кипятить 5 мин. Установить рН=7,4—7,5 (Natr. carbon.). Несколько минут дать отстояться (в коническом собуде), прозрачную жидкость слить с осадка, разлить по пробиркам, стерилизовать дробно или в автоклаве 20 минут при 115° (большие бутылки стерилизовать 2 раза), б) Гормонная желатина: 10 г желатины (хорошей) растворяют в 1 л воды; в остальном—по предыдущему. в) Кровяной гормонный агар: обычный агар + 5% свежей дефибрини-рованной человеческой крови. Хорошая среда для сохранения культур; на косо застывшем агаре рост при 37° сутки, заливание жидким парафином, сохранение в косом положении на рассеянном свете в комнатной t°. Жизнеспособность сохраняется 3—12 месяцев. 11) Среда Вассермана (см. ниже среды для гонококков). 12) С р е д а мозговая: 1ч. воды + 2 части протертого через решето или сито мозга. Стерилизация при 100° 3 дня подряд. 13) Среда Сакепе и Делатера (Sacquepee, Delater). В Эрленмейер. колбе смешиваются белки 2 яиц, прибавляется тройное количество дест. воды и 0,5 (на 100) 10%-ного раствора едкого натрия. Стерилизация в автоклаве 15 мин. при 115°. Прибавить 1 часть этой жидкости к 5 ч
1. стерильного нейтрального агара (55°) и разливать по чашкам. 14) Среда ММ (Салимбени и д Эреля): 1
л пептона Мартена (6—8-часовой); подщелачивание, осаждение нагреванием в автоклаве ,15 мин. при 120°. Фильтрование через бумажный фильтр, прибавление 2
г глюкозы, разливание и стерилизация в автоклаве 15 мин. при 112—115°. 15) С р еда Унгерман а-тсм. среды для простейших, N» 5. 16) Сыворотка Бухмана, модификация Лефлеровской сыворотки: 75 ч. сыворотки рогатого скота, 25 ч- бульона, 1% декстрозы с прибавкой нейтральрота (0,5 :10 000); рост в виде красных колоний. VІII. Среды для гонококков; opt. роста 36—37°. Границы 25-—40°. Реакция среды слабощелочная (рН — 7,3); пределы рН—6,0— 8,3. 1) Агар кровя tro й (1 ч. дефибрини-рованной крови+ 2 части питательного агара). 2) Асцит-агар поЛингельсгейму (Lingelsheim) для диференциации различных кокков. К 100
см3 асцит-агара прибавляют 15
см3 стерильного раствора лакмусовой настойки и 1 г декстрозы, мальтозы или левулезы (сахар растворяют в 10 ел»
3 дест. воды и
а/
2'часа кипятят в аппарате Коха; по охлаждении прибавляют к асцит-агару) и разливают в чашки Петри (колонии гонококка бесцветные). 3) А с-цит-бульон (1 ч.+З ч.). 4) Лимоннокислый асцит-агар И к о м а (1со-та), асцит-агар с 0,4% и-лимонной кислоты. 5) Пептон-глицерин-асцит-агар nq Киферу (Kiefer): питательный агар (37
2% агара, 0,5% NaCl, 1%. пептона, 2% глицерина) + асцитич. жидкость аа (смешивается с остуженным до 40° агаром). 6) Вассермана среда: 15
см3 свиной сыворотки (или сыворотки другого животного), 30—50
см3 воды, 3
см3 глицерина, 0,8
г нутрозы (Caseinna-triumpho'sphat); кипятить 15 мин. при тщательном помешивании. Разлить по пробиркам и стерилизовать в текучем паре. Перед применением слить аа с 2%-ным стерильным агаром, растопленным и остуженным до 50—60°. Очень хорошая среда. 7) Среда Лебефа (Leboeuf): 4
л печоночного бульона, 400
см3 раствора яичного белка, 20
г картофельного крахмала (проверить нейтральность реакции), 20
г на 1
л агара; стерилизация 35 минут в автоклаве при 115°. Хорошая среда для приготовления вакцин. 8) Среда Настюкова: к мясопептонному агару, расплавленному и остуженному до 45
е, добавить
х/з яичных желтков, стерильно собранных и смешанных с тремя объемами стерилизованной воды. 9) Среда Ник о л я (Nicolle) для приготовления вакцины: 100
см3 мясного бульона, 0,4
г мочевины, 2 s чистой глюкозы, 0,05 г фосфорнокислого аммония, 1
г морской соли, 1,5
г агара. К готовой среде прибавить 0,5
см3 сыворотки кролика на 5 еж
3 среды. 10) Среда Сабур о и Нуаре (Sabouraud, Noire): агар с молочной сывороткой, глюкозой и мочевиной; 1
л свежего молока кипятить 5 мин.; осадить казеин прибавлением 2
см3 НС1, пропустить через сито, покрытое гидрофильной ватой. Прибавить % объема воды, нейтрализовать 10%-ным раствором соды. Стерилизация в автоклаве 10 минут при 120°; фильтровать; прибавить 1% пептона, 1% глю-
13» козы или -сахарозы, 0,3% мочевины, 1,6% агара, распустить в автоклаве, фильтровать через бумагу. Разлить по пробиркам, стерилизовать 10 минут при 110°. 11) Сыворотка человеческая свернутая. IX. Специальные среды для стрептококков; opt. t° 24—38°; рН границы— 5,5—870; opt. рН—6,2—7,0. 1) А г а р с кровью (10% бараньей крови). 2) Агар лактозный лакмусовый (колонии голубые). 3) 1%-ный бульон сахарный. 4) Серум-бульон Марморека: а) 1 часть свежеприготовленного щелочного (ок. 5
ем3 едкого натра на 1
л) бульона+2 части свежей человеческой сыворотки; б) 2 насти бульона+1 часть асцитич. жидкости; в) 1 часть бульона Мартена+ 1 часть человеч. сыворотки (инактивированной 30 мин. при 58°). 5) Среда обогащения Вейсенбаха (Weissen-bach): пептопная вода с глюкозой на яичном белке, щелочная; 100
см3 воды, 4
г пептона Ша-пото, 0,5 з NaCl; 0,2
г глюкозы, 100
см3 яичного белка (подщелоченного содой и разведенного в 3 раза дест. водой). 6) Бульон Альдерс-г о ф a (Aldershoff) для получения скарлатинозного токсина; 300
г мяса, 500
см3 дест. воды, 500
см3 0,8%-ного раствора соды, 5
ом3 хлороформа, 2
г панкреатина химически чистого (Merck), 80
см3 соляной к-ты (нормальной). Подробное приготовление—см.
Стрептококки.—Диферен-циальные среды для различных видов стрептококков (haemol., anhaemolyt., viridans, Entero-cocc, Stf. mucosus и пр.)—см..соответствующие отделы. 7) Агар желчно-кровяной: а) 80 ел*
3 3%-ного питательного агара (растопленного и остуженного до 50°); б) 10
см3 бычьей желчи (стерилизация 2 дня подряд по 20 мин. в аппарате Коха); в) 10
см3 дефибринированной крови барана. Перед смешиванием желчь нагревается до 45—50° (чашки Петри). 8) Агар с гретой кровью Билинга (Bieling): 3%-ный питательный агар (1% пептона), нагретый до кипения,+ 15% дефибринированной крови (барана или лошади), разлить по чашкам. 9) Агар сахарно-кровяной по Ковачу (Kovacs): 2%-ный сахарный агар + +дефибринированная баранья кровь 1 : 5(чашки Петри).10) СредаРымовича: обычный агар (рН—7,6)+
1/
3 объема дефибринированной и освобожденной от стромы лаковой крови голубя; отличие скарлатинозного стрептококка от других гемолитических стрептококков—растет на средах Рымовича в виде белых колоний без конденс'ации ЫЬ. 11) СредаСпанье (Spanier): сыворотки 1 часть, 2 части Aq. de-still., 0,2% эскулина, 8% лакмусовой настойки. При образовании кислот покраснение и выпадение белка. 12) Среда эскулино-вая Гаррисона и Вандербека (Harrison, Wanderbeck): 1,5 а пептона, 0,5 з Natrii taurocholici, 0,1 з эскулцна, 0,05е лимоннокислого железа на 100
см3 воды. При расцеплении эскулина—почернение среды. Энтерококк расщепляет эскулин, устойчив к желчи, не гемолизирует, рост его не задерживается желчью. 13) Эскулин-бульон Курт М е й е р а: об.ычный бульон+ 0,2% эскулина. Диференциация с энтерококком. X. Среды для пневмококков. Границы рН—7,0—8,3; opt. рН—7,8. 1) Агар .пептонный с кровью (кролика или человека). 2) Агар кровяной Билинга: 20
см3 дест. воды, 40
см3 дефибринированной лошадиной" крови, 60
см3 агара; рН — 7,5. 3) А г а-р Т. (Truche) :
;такой же состав, как среда Т, (см. ниже)+ 20 з агара на 1
.л. После растворения агара—подщелочить до слабощелочной реакции. Не фильтруя, разливают по пробиркам, стерилизуют 20 минут при 110°. 4) Серум-бульон Нейфельда щелочной реакции (5—10% сыворотки). Среда хороша для сохранения вирулентности. 5) Серум-агар Вексельбаума:1ч. серум+ 2 ч. агара. 6)СредаСалимбени ид'Эре-л я: мацерация свиных желудков (см. выше бульон Мартена) в течение 7—8 часов при 50°. При 55° прибавляют на 1 л 10
см3 НС1 и при встряхивании 300
г кашицы из
ч желудков (пропущенной через мясорубку). Выдерживают 7—8 час. при 50° и затем поднимают t° до 80— 90° чтобы разрушить пепсин и остановить переваривание. Подщелачивают и стерилизуют при '120°. Фильтруют через смоченный бумажный фильтр (Chardin) и прибавляют 2
г глюкозы. Разливают, стерилизуют при 112—115°. Хорошая среда для сохранения пневмококков. 7) Среда Трюша жидкая (Truche): 4 з пептона Шапото, 0,5 з NaCl, 0,2 з глюкозы, 100
см3 дест. воды, растворяется при 80°; слегка подщелачивается (слабо розовое окрашивание по фенолфталеину). Кипятится 5 .минут, фильтруется, разливается, стерилизуется
1/i часа при 110°. Для первых культур хорошо прибавить
х/з асцитической жидкости. Для сохранения вирулентности пневмококков прибавляется
2/з желатины (15%-ной), растворенной в физиол. растворе и подщелоченной (полужидкая среда). 8) С р е д aN. С. Т. (Nicolle, Cotoni, Truche): в 1 л жидкой среды Truche, нагретой на водяной бане, растворить 150 з желатины при 55°, прибавить белок яйца, подщелочить, нагревать
ХД
часа при 110°. Перед применением среда распускается в водяной бане. Культура засевается 1 часть на 2 части среды. Сохраняется на леднике (жизнеспособность и вирулентность держится несколько месяцев). 9) Среда Гентуна, L. A. P. (Huhtoon): 0,5% лактозы, 0,2% амноида, 0,1% пептона, 0,25% NaCl, 0,5% двуосновного фосфорнокислого калия, 0,03% одноосновного фосфорнокислого калия; смесь растворяется при кипячении в водопроводной воде. Лактоза растворяется в количестве 10—15% в дест. воде, стерилизуется и прибавляется к общей смеси> 10) Сыворотка Унгермана (Ungermann) (см. среды для спирохет) для поддержания длительности культур. И) Опт охи новый агар: а) ОД з ор-tochini hydrochlorici растворить при нагревании в 10
см3 Aq. destillat. (быстро разлагается); б) 1 еж
3 раствора оптохина (1%-ного) прибавляется к 150
см3 2V2%-Horo агара; в) 60
см3 лошадиной крови смешивают с 90
ем3 стерильной дестилир. воды, выдерживают 1 час при 60°. Оптохиновый агар вливают в кровяную смесь, Осторожно смешивают. Рост пневмококков на этой среде задержан, стрептококков нет. 12) Серум-инулин-бульон Г и с а: 2 части питательного бульона+ 1 часть сыворотки; к 100 частям этой смеси прибавить 6 частей обыкновенного раствора лакмуса, в котором растворена при нагревании 1 часть инулина (1 + 5). Диференциация с пневмококками (к-та). 13) Среда Г и с с а:' 1 часть сыворотки быка, 2 части Aq. destillat.; к этому прибавляют 1% лакмусовой настойки (5%-ной); смесь нагревается до 100°, фильтруется, прибавляется 1% инулина. Дробная стерилизация при 100°. Диференциальная среда—пневмококк раз- лагает инулин (среда краснеет), стрептококк не изменяет ее (исключение иногда зеленый стрептококк). 14) Среда Саломона (Salomon) для диференцирования-с Str. mucosus и пневмококком (стрептококк разлагает растворимый крахмал, сахарозу, лактозу с образованием кислоты). К 10
см3 питательного агара (3%-ного), расплавленного и остуженного до 58
d, прибавляют 1,5
см3 10%-ного раствора растворимого крахмала (в лакмусовой настойке) и затем 5
см3 свежей асцитической жидкости (инактивиро-ванной нагреванием в водяной бане 30 мин.). Разливают по чашкам. XI. Среды для чумных бактерий: opt. t° 30—35°; рост возможен при-Ь5° (отличие от других патогенных бактерий); рН'границы—5,6—7,5; opt..pH—6,5—7. Рост на обычных средах. 1)Агар с солью: обычныймя-сопептонный arap + NaCl (2,5—5 на 100)—быстрое появление инволюционных форм. Дифе-ренциальная сре^а с бацилами псевдотуберкулеза грызунов. 2) Среда Гиммель-ф а р б а (см.
Чума) для диференциации с чумными ба'шлами. 3) Среда Никаноро-в а : 100
см" ороженного бульона Мартена; 2 г агара в пор шке, 0,01
г крезолрот.. Бульон фильтруется
ч /рез свечу. Смесь недолго кипятится, разливается в стерильные пробирки и остужается в косом положении. Цвет среды желто-оранжевый (рН—7). Краснеет через сутки при росте псевдотуберкулезных бацил (щелочение), бацилы чумы почти не изменяют через 24 часа. XII. Среды для возбудителя ту"-ляремии. 1) Среда Френсиса (Francis): мясопептонный агар + 5% лошадиной сыворотки, 1 % глюкозы, 0,1 г цистина; или агар + + 1% глюкозы.+ 5% кроличьей крови; рН= =7,3; opt. роста—37°, колонии через 2—3 дня в виде капель росы, слизистые, плохо растирающиеся в физиол. растворе. 2)СредаМек-Коя и Чепина (Mac Coy, Chapin): смешивается яйцо (4 части) и 1 часть воды или молока или 3 части яичного желтка и 2 части физиол. раствора; смесь,свертывается в аппарате Коха, как обычно. XIII. Среды для анаэробов—см.
Микроорганизмы, культивирование микробов. Рост в условиях анаэробиоза, opt. 37°, рН— 6,0—7,б"для В. perfringens, рН—5,5—8,3, opt. 7,0—для В. tetani; в основу сред предпочтительно употреблять раствор пептона, приготовленного по способу Мартена. 1) Агар сахарно-кровяной Цейслера: слабощелочной агар (по лакмусу) с 2-—3% агара и 2% глюкозы растапливается и охлаждается до 45° (или в больших пробирках или же переливается в мерительный цилиндр); к нему прибавляется около 20% свежей дефибринированной крови (на 60
ом3 —12—15
т3), перемешивается и разливается в чашки Петри. Перед засевом чашки 2 дня выдерживаются при комнатной t°. 2) А г а р к р о в я н о и—-см.
Кровь, кровь как питательная среда. 3)Бульонснейтраль-рот (1%).4) Бульон с ж'елчью (1:5). 5) Печоночн.ый бульон Кит т-Т а р о ц-ц и (Kitt-Tarozzi): а) в бульон (рН—7,4—7,6), разлитый в пробирки (8
см3), кладут по 2—3 кусочка свежей печонки весом 1—-3
г (морской свинки, кролика, теленка), стерилизуют в автоклаве 20 мин. при 110°; б) к печени, нарезанной кусочками, прибавляют троекратное количество питательного бульона и кипятят в Коховском аппарате 30 мин. Бульон фильтру- ют, кусочки промывают на сите водопроводной водой и распределяют по 3—4 кусочка по пробиркам (+7—8
см3 бульона). Стерилизация 30 мин. при 110°. 6) Бульон с кусочками мяса: свежее провернутое мясо раскладывается по пробиркам (около 3—4 г), заливается 8
см3 бульона (рН—7,4—7,6) и стерилизуется в автоклаве30мин. при 110°. 7) Бульон с кусочками вареного бел к а—см.
Микроорганизмы, культивирование микробов (Taroz-zi, Noguchi). 8) Бульон кровяной Кит-т а: слабощелочной мясопептонный бульон с добавлением свежей стерильной крови человека, барана и пр. (3
см3 на пробирку). 9) Бульон «переброженный» Вюркера(Wurckei): бульон (750
см3) в колбе с мелкоизмельчен-ной печенью (250
г), простерилизованный в автоклаве, засевается чистой культурой Вас. putrificus Bienstock и ставится на 14 дней в термостат; затем стерилизуется под давлением, фильтруется через асбестовый фильтр, смешивается поровну со слабощелочным бульоном, разливается по пробиркам, стерилизуется. 10) Мозговая кашица (Hibler): свежий, очищенный от оболочек мозг пропускается че-. рез мясорубку; на 2 части мозга прибавить 1 часть водопроводной воды (нейтральная реакция), пропустить через волосяное сито; 2 часа варить в аппарате Коха. Разлить по пробиркам (10
см3), стерилизовать в автоклаве 2 часа при 110°. На этой среде, так же как и на печоночном бульоне, анаэробы растут без особых мероприятий, преграждающих доступ воздуха; мозговая ткань обладает восстанавливающим действием. Среда имеет диференциальное значение, т. к. выделяющие H
2S и щелочь анаэробы «чернят» среду (образование сернистого железа), а выделяющие кислоту окрашивают ее в розовый цвет. Среда пригодна для сохранения культур. 11) Молоко с к у с о ч к ами п еч е н и по РуппертуиРотгардту (Ruppert, Rott-gardt), Кусочки свежей печени или почки (морской свинки) в 3—4
г кладутся в пробирки с 8
см3 коровьего молока, стерилизуются в ав- \ токлаве 60 мин. при 110°. 12) Лакмусовое м о л 0 к о—см.
Молоко, молоко как питательная среда. 13) Пептонная вода 2%-ная. 14) Среда с ватой Врублевского—см.
Микроорганизмы, культивирование микробов. 15) Среда Ногуши-Смита (Noguchi, Smith): асцитический бульон со стерильными кусочками свежей почки. У обескровленного кролика стерильно вырезается почка, стерильно разрезается на 8 частей, промывается физиол. раствором, раскладывается по стерильным пробиркам, доливается 8—10
см3 стерильного асцитического -бульона. Контроль стерильности 5—6 суток при 37°. После посева заливается стерильным вазелиновым маслом (1—2
см толщины). 16) Среда с цистеи-ном Фрея и Ридмюллера (Frei, Ried-milller): обыкновенный бульон из сердца или мяса рогатого скота или лошади + 1% пептона, 0,5% NaCI и 27
2% агара; рН—7,4. К расплавленному агару (70°) прибавл. 1% 0,015%-ного солянокислого цистеина; 10%-ный раствор NaOH до рН = 7,4. Стерилизация
1/
2—
3Д часа в ■ текучем паре. Рост возможен в аэробных условиях. 17) Среда Wilso n'a и Мае V. В 1 а-' i г'а: 100
см3 3%-ного сахарного (глюкоза) агара, 10
см3 20%-ного раствор'а, свеже приготовленного на дестшпф. воде сернистокислого натрия и 1'
см3 8%-ного раствора хлорного железа. От восстановления некоторыми анаэро- бами (Вас. fallax, B. perfringens, септич. вибрион, Вас. Chauvoei, B. sporogenes) сернисто-кислого натрця происходит соединение сульфида натрия с хлорным железом и образование черного осадка сернистого железа. Углеводные среды (для изучения брожения). 18) Лакмусовый бульон с углеводами: питательный бульон (рН—7,2)+ 7,5% лакмусовой настойки и 1 % углеводов (глицерина, маннита, изодульцита, глюкозы, галактозы, левулезы, сахарозы, лактозы, мальтозы, инулина, салицина). 19) У г л е в о д ы на 2%-ной пептон н ой воде готовятся в виде основных растворов: 30% сахарозы, 30% глюкозы, 17% лактозы, 30% мальтозы, 15%. маннита, 30% левулезы (не стерилизовать); 30% галактозы, 14% раффинозы, 30% глицерина, 30% дульцита, 30% арабинозы, 15% ксилозы, 30% декстрина, 15% рамнозы (изодульцит), растворить при нагревании (на сетке), профильтровать через бумагу, разлить по ампулам, запаять, стерилизовать 15 мин. при 110°. Прибавлять в каждую пробирку с 2%-ной пептон-ной водой перед посевом по 5 капель основного раствора. Результат брожения определяется прибавлением после роста 2—3 капель лакмусовой настойки в каждую пробирку. XIV. Среды для патогенных грибков. 1) Среда Сабуро для выделения (Milieu d 'epreuve de Sabouraud): 1 000
см3 воды, 18 з агара, 40
г мальтозы (brute de Chanut), 10 е пептона (granulee de Chassaing). Отдельно разварить в течение
1/а часа агар в воде и отдельно растворить в воде пептон и мальтозу. Смешать, поставить в автоклав, нагреть до 120°, вынуть из автоклава, фильтровать горячим через фильтр Шардена, разлить. Стерилизовать, как указано выше. 2) Среда Сабуро для сохранения (Milieu de conservation de Sab.ou-raud): 1,8% агара, 1% пептона, 1 000
см3 воды. Приготовление, как предыдущей. 3) Среда Сабуро для споротрихов: 10
г агара, 10 з пептона Шапото, 40
г глюкозы, 1 000
см3 воды. Культивирование при комнатной t°; opt. 22—30°. 4) Среда Плаута (Plaut) для,, исходной культуры: 1—2
г пептона, 1
г глюкозы, 0,5
г глицерина, 2
г агара, 0,5'
г NaCl, 100
см3 воды. Нейтрализация не производится. 5) Среда Грюца (Grutz): 5
г пептона Кноля (растворяется в нескольких
см3 воды при легком нагревании), 10
г глюкозы, 5
г глицерина, 5
г NaCl, 1 000
см3 1,8 %-ного агара. 6) Среда для сохранения Грюца: 30
г пептона, 1 000
см3 1,8 %-ного агара. Выращивание патогенных грибков производится в комнатной t°, не закрывая резиновыми колпачками, на рассеянном свету. XV. Среды для пр остейших—см.
Микроорганизмы, культивирование простейших. А. Спирохеты. Спирохеты растут в условиях относительного анаэробиоза. 1) Л с-цит-агар Ногуши для бледной спирохеты, спир. Обермейера, Sp. gallinarum, Sp. icteroge-nes: 2 части слабощелочного 2 %-ного агара+ + 1 часть асцита или жидкости hydrocele. Разливается в пробирки по 15
см3, в каждую вносится кусочек свежего органа кролика (почки, яичка), сверху заливается слоем жидкого парафина высотой в 3
см (асцитическая жидкость не должна содержать желчь). 2) Среда Ари-стовского и Хольтцера (для бледной спирохеты): сыворотка кролика (неразведен-ная или разведенная физиол. раствором 1 : 2), инактивированная 1час при 60°,с кусочком све- жего яичка или мозга. (Вместо сыворотки кролика можно взять асцитическую жидкость ил» человеческую сыворотку.) 3) Среда с кровяным экстрактом: а) сгустки крови лошади протереть через сито, прибавить при нагревании двойной объем физиол. раствора NaCl (8%
0); б) нагревать до 75° в течение 15—20 минут,.фильтровать через бумагу, затем через свечу Шамберлана Ьз., прибавить немного стерильной сыворотки кролика (5%), стерилизовать дробно 3 дня подряд при 56° по 30 минут (среда для Sp. icterohaemorrhag., спирохеты б-ни Вей-ля). 4) Среда Н.огуши (для различных кровяных спирохет): 80 ел
3 стерильного физиол.' раствора, 10
см3 сыворотки кролика,. свежей и стерильной, 10
см3 2%-ного мясопептонного
; агара (рН—7,2), распущенного и остуженного до 95°, 0,5
см3 стерильного раствора НЬ. Застывает столбиком. После засева покрыть слоем вазелинового масла. 5) С р е д а У н г е р м а н а. (Ungermann): стерильная свежая сыворотка (кро'лика), разбавленная небольшим количеством физиол. раствора или жидкости Рингера, разливается по пробиркам, нагревается У
2 часа при 58—60° и заливается от доступа воздуха стерильным парафином (для культивирования спирохет icterogenes, Obermeieri, Duttoni).. 6) СредаШерешевского (для бледной спирохеты): свернутая ..лошадиная сыворотка (на водяной бане при медленном поднятии температуры до 70°) столбиком. 7) Сывороточная вода Ногуши (для бледной спирохеты): 1 часть сыворотки кролика+ 3 части дест. воды; к смеси прибавляется кусочек почки или яичка. Заливается парафином,по предыдущему. 8) Сыворотка водная Уленгута (TJhlen-huth) для спирохеты icterogenes: смешивается стерильная сыворотка кролика и водопроводная вода в отношении 1 : 30. После засева покрыть слоем парафина. 9) Сыворотка лошадиная Шмамина (Chmamine)для бледной сцирохеты: к 200
см3 лошадиной сыворотки прибавляется при покачивании сосуда 1—1,5
г ну-клеиновокислого натрия. Пропускается С0
2(и» аппарата Киппа) в течение 2—3 минут—достигается прозрачность среды. Сыворотка разливается высоким слоем в пробирках, нагреваемся 3 дня по 1 часу при 60° и 4-й медленно до 70°. 10) Сыворотка лошадиная Хата (На-ta) для спирохет Обермейера: свежая лошади-над, сыворотка разливается в пробирки (15— 17
мм ширины) по 4
см3; в каждую прибавляется 8
см3 физиол. раствора и смешивается. Затем пробирки выдерживаются в водяной бане-3 часа при 58°; медленно поднимают t° до 70— ,71°, держат
1/
2 часа при 7Г. В полутвердую сыворотку кладут по маленькому кусочку почки кролика. Засев в» глубину. Б. Амебы. 1) Настой и отвар соломы. 2) Желатина Мутона (Mouton): 900
см3 слабощелочной воды, 100
см3 обычного питательного бульона, 2D
г желатины. 3) А г а р Шардингера: 30 г сена+1
л воды, прибавить 1—1,5 г гидрата извести в порошке-, на 24—36 час. в термостат; фильтрование, подще-лачивание. Прибавление 1—2у
2%-ного
1 агара. Засевание материала в конденсационную воду. 4) Агар Ф.роша: 0,5
г агара, 90
см3 водо-проз. воды, 10
см3 слабощелочн. питат. бульона. 5) Агар Мусгрева и Клегга (Musgrave, Clegg): 20
г агара, 1 000
см3 дест. воды, 0»3—0,5
г мясного-экстракта, 0,3 — 0,5 г NaCl. Слегка подщелочить едким натром. Патогенные амебы. культивируются на белковых средах.
14в В. Ж г у.т иковые простейшие. 1) Среда Мек Нилаи Нови (Mac Neal, Novy): 2 части дефибринированной крови кролика и 1 часть агара. Рост в конденсационной воде. 2) N N N—а гар Николя (Nicolle)— модификация предыдущего: 900
езк* дест. воды, 14
г агар-агара, 60
г NaCl. При t° 43° прибавляют дефибринированную кровь кролика в отношении 1:2. 3) Жидкая среда Лаве рана и Пти (Laveran, Petit): 2
г пептона Ша-пото, 6
г NaCl, 900
см3 дест. воды. Эта пеп-тонная вода смешивается поровну с дефибринированной кроличьей кровью. 4) Кровяной агар Неллера (Noller): 25
г агара, 20
г глюкозы, 1 000
еж3 слабощелочного лошадиного бульона. Разливается в пробирки. Перед прибавлением крови к растопленному агару приливается равный или половинный объем дефибринированной крови лошади, и среда оставляется для застывания в косом положении. Регенерация агара имеет целью освежение уже использованного агара (из экономических целей). При регенерации принимаются во внимание следующие пункты: 1) бактерии и продукты их обмена должны быть удалены; 2) потребленные питательные вещества должны быть возмещены; 3) специально прибавленные вещества (индикаторы и пр.Xдолжны быть удалены .—Регенерация простого агара производится следующим образом: агар стерилизуется, сливается в кастрюли, оставляется до застывания. После застывания вынимается целиком, срезается нижняя мутная часть, остальная масса агара разрезается на кусочки и промывается в текучей воде 1 сутки и более. 1) На 60
л промытого агара прибавляется 15 л мясной воды, 15 л жидкого пептона, 600
г сухого агара, 150 в NaCl. 2) К 1 л регенерируемого агара пда-бав'ляют 500
см3 дест. воды, смесь распускается на огне. На 1 л исходной среды прибавляют 3
смг 10%-ного раствора соды, кипятят.У
2 часа для стерилизации. Прибавляют затем 20
г животного угля на 1 л среды и еще полчаса кипятят; среда просветляется вследствие поглощения бактерий углем. Дать остыть до 50—60°, прибавить 30 еж
3 сыворотки (вместо яичного белка). Вместо растворов пептона и Либиховского экстракта можно прибавить на 1 л регенерируемой среды у
2 л обыкновенного бульона или бульона Готтингера. 3) Регенерация агара; по методу Контрольного ин-та. Использованный агар стерилизуют в автоклаве 20 мин. при 125°, сливают в низкую широкую кастрюлю, остуживают и режут на мелкие куски; последние кладут на решето и ставят под струей проточной воды на 18—24 часа. Затем растапливают, проверяют и устанавливают реакциюпо лакмус.. бумажке, измеряют объем и добавляют в размере 7з этого объема нейтрального бульона и на общее количество—2,5% сухого агар-агара. Перед стерилизацией прибавляют белок (1—2 на литр) и ставят на 20 мин. в автоклав при t°\ 120° (белок перед прибавлением размешать в небольшом количестве дестилированной воды). Фильтруют, разливают по пробиркам и стерилизуют при 120
е.
Лит.: Абрамове, Бактериологическая методика, М., 1927; В е й н б е р г М. и Г и н з б у р г- В., Анаэробные микробы и их роль в патологий, М., 1928; К а л ь -меттА., Нзгр Л. и Б о к э А., Руководство по микробиологической и серологической технике,Москва—JJ., 1928; Розен П., Практическое руководство но бактериологической технике, М.—Л., 1931; Handbuch der mik-roblologischen Technik, hrsg. v.
R. Kraus u. P. Uhlen-buth, B. I—III, В.—Wien, 1923—24; Handbuch der pa- thogenen Mikroorganisrnen, hrsg. v. W. Kolle, R. Kraus-u. P. TJiilenhuth, B. IX—X, Jena—В.—Wien, 1929—30 (лит.); Kahlfeld-Walilich, Bakteriologische-Nahrtoden-Technik, В., 1929.
А.
Тогунова.
Смотрите также:
- ПИТИАТИЗМ, см. Истерия.
- PITYRIASIS (от греч. pityron—отруби), со времени Виллана и Бейтмена (Willan, Bateman> морфологич. термин для обозначения стойкого мелкого отрубевидного шелушения, пятнистого-или диффузного, на сухой (без мокнутия и корок) коже, то неизмененной в ...
- ПИТУИТРИН (Pituitrinum; Pituitrinum sic-cum Ф VІI)-, экстракт из мозговогр придатка. Несмотря на то, что передняя доля гипофиза имеет по всем данным очень большое значение для развития и жизнедеятельности организма, лишь в ...
- ПИУРИЯ, pyuria (от греч. pyon—гной w ouron—моча), сип. лейкоцитурия, выделение гноя с мочой. Источником гноя в моче могут быть воспалительные состояния мочевых органов? (уретра, пузырь, мочеточник, почка и почечная лоханка) ...
- ПИЩЕВАРЕНИЕ. Встречается 2 типа П.— внутриклеточное и внеклеточное. При внеклеточном П., широко распространенном среди высших организмов, процесс протекает в .специальной системе органов кишечной трубки с ее железистым аппаратом. П.—это хим.-физ., ...